[发明专利]一种适用于Pacbio三代长读长测序的高质量浒苔DNA的提取方法

权利要求书

1.一种适用于Pacbio三代长读长测序的DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取大片段浒苔DNA

1)将CTAB裂解液和β-巯基乙醇加入离心管中，然后55-70℃预热；

2)将液氮研磨后的浒苔粉末倒入所述步骤1)预热后的离心管中，迅速用手将管内液体摇匀；

3)向所述步骤2)中加入蛋白酶K和RNA酶A，用手将管内液体摇匀，置于55-70℃恒温金属浴中温育30-90分钟；

4)冷却，然后加入预冷的体积比为25：24：1的酚：氯仿：异戊醇，用手摇匀后置于0-8℃放置1-15分钟；

5)离心取上清，然后在上清中加入体积比为24：1的氯仿：异戊醇，用手摇匀，置于0-8℃放置1-30分钟；

6)离心取上清，加入0.5-1倍上清体积的异丙醇，用手将离心管轻柔颠倒混匀，置于-20～-80℃冷冻10分钟-2小时；

7)离心，用70％的乙醇洗涤沉淀，然后离心，去除上清，得大片段浒苔DNA；待所述浒苔DNA干燥后，用洗脱缓冲液溶解所述浒苔DNA；

(2)稀释DNA并用磁珠纯化DNA

8)向所述步骤7)中浓度低于50ng/μl的浒苔DNA中加入0.6×的纯化磁珠，室温静止10分钟；

9)然后置于磁力架上吸附5分钟，去掉上清，用70％乙醇洗涤10秒，去掉上清，洗涤2次，去掉残余酒精，从磁力架上取下离心管；

10)用洗脱缓冲液洗脱浒苔DNA，室温静置2分钟后，置于磁力架上吸附5分钟后，吸取上清置于新的离心管中，得到浒苔DNA。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述含有β-巯基乙醇的CTAB裂解液中β-巯基乙醇的终浓度为2％-6％。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)中，所述CTAB裂解液包括2％-3％的CTAB，1-2M的NaCl和50-200mM的Tris(pH8.0)，10-30mM的EDTA。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，所述蛋白酶K的体积为10-30μl；所述RNA酶的体积为2-6μl；

和/或，所述步骤4)中，所述酚为pH8.0的tris饱和酚。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)-7)离心的条件均为：12000-14000rpm，0-6℃低温离心5-30分钟。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤7)中，所述大片段浒苔DNA是指片段长度大于50kb的浒苔DNA。

7.一种DNA抽提试剂盒，其特征在于，包括裂解液，蛋白酶K和RNA酶A。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包含2％-3％的CTAB，1-2M的NaCl和50-200mM的Tris(pH8.0)，10-30mM的EDTA，使用前加入2％-6％的β-巯基乙醇。

9.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述DNA抽提试剂盒中蛋白酶K和RNaseA的含量分别为10-30μl/样本和2-6μl/样本。

10.如权利要求7-9之任一项所述的DNA抽提试剂盒在提取DNA中的应用。