[发明专利]一种动物胎盘脂多糖、动物血干扰素复合免疫增强剂

权利要求书

1.一种动物胎盘脂多糖、动物血干扰素复合免疫增强剂，其特征在于，所述复合免疫增强剂，包括下述重量份的原料：以动物胎盘脂多糖、动物血干扰素为主要原料，加有无菌生理盐水以及辅料组成，其具体配方为每100 mL中含有胎盘脂多糖5-30 mg；干扰素10500-10800IU；聚乙二醇酯15-20g；余量由无菌生理盐水补足，pH为6.0-8.0。

2.根据权利要求1所述的一种动物胎盘脂多糖、动物血干扰素复合免疫增强剂，其特征在于，所述动物胎盘采用猪、牛、羊其中一种或多种的胎盘，所述动物血为猪、牛、羊、鸡、鸭、鹅其中一种或多种的血液。

3.根据权利要求1所述的一种动物胎盘脂多糖、动物血干扰素复合免疫增强剂，其特征在于，所述其中的动物胎盘脂多糖是通过以下提取工艺步骤得到的：

以新鲜动物胎盘为原料，去除胎膜和脐带，用纯水冲洗干净，依次用绞肉机、胶体磨、研磨机粉碎后，放-20℃以下冷库速冻24-48 h，然后取出37℃水浴融化，如此冻融3-5次后置于反应釜中进行消化酶解；

（2）向反应釜中加2-3倍原料重的生理盐水，加入原料重量20-40%的新鲜胰浆，用饱和氢氧化钙调pH值至7.5-8.5，间隙搅拌下，加热至50-55℃，消化10-12 h后，加热至60℃，用超声波发生器中波处理20-30 min，冷却至室温；用过滤式离心机离心过滤，滤液为酶解液；

（3）将酶解液用醋酸调pH值至4.0-6.0，放冷藏室静置过夜，然后在8000 r/min以上高速，4-8℃条件下离心20-30 min，分别收集上清液和沉淀，上清液即为脂多糖多肽粗提液；

（4）将脂多糖多肽粗提液用截留分子量10万的超滤装置进行超滤，透过液再经截留分子量1万超滤装置进行超滤，收集浓缩液即为脂多糖提取液。

4.根据权利要求1所述的一种动物胎盘脂多糖、动物血干扰素复合免疫增强剂，其特征在于，所述其中的动物血干扰素是通过以下提取工艺步骤得到的：

（1）无菌采集健康动物鲜血，于10℃的条件下离心20min，吸取中间层白细胞，用质量分数为0.85％NH₄Cl洗涤两次后离心，收集沉淀白细胞，除去NH4Cl，按照白细胞：培养液体积比1:10加入含5％动物血清的Eagle`sMEM混合培养液悬浮，将动物白细胞数稀释在10×10⁷ 个/ml～25×10⁷个/ml之间，制得动物白细胞悬浮液；

（2）取一份动物白细胞悬浮液，加入含100个活性单位的动物白细胞干扰素，置于37℃水浴摇床搅拌培养48h；

（3）按照每毫升动物白细胞悬液50HANDVⅡ的加入量，在细胞悬液中加入一定量新城疫病毒NDVⅡ，调节pH为7.5，在水浴恒温振荡器37℃旋转培养24h，培养完成后，用6MHCl 把培养液的pH调至3.5，在4℃下酸化处理4d，再用质量体积浓度6%的NaOH溶液把pH调至 7.2，离心去除沉淀，取上清液，制得动物白细胞干扰素粗制液。

5.一种如权利要求1所述的动物胎盘脂多糖、动物血干扰素复合免疫增强剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）取一份动物白细胞干扰素粗制液，用NaOH溶液调节pH值到8.5，在冰浴条件下，按照干扰素粗制液：聚乙二醇酯摩尔比1:5向溶液中加入聚乙二醇酯，聚乙二醇酯加入量为五份，升温至4℃，搅拌反应2h，向溶液中加入五份聚乙二醇酯，升温至12℃，搅拌反应2h，向溶液中加入五份聚乙二醇酯，升温至25℃，搅拌反应2h，向溶液加入五份聚乙二醇酯，升温至36℃，搅拌反应2h，完全反应后，加入0.75Μ的半胱甘氨酸终止反应，得到聚乙二醇酯修饰的干扰素；

（2）先将聚乙二醇修饰的干扰素和脂多糖按配方称重后混合，加入总体积50-80%的生理盐水，搅拌均匀，后经过0.22μm除菌膜除菌；

（3）在净化百级条件下无菌操作将灭菌后混合液用饱和氢氧化钙调pH值至6.0-8.0，搅拌均匀，最后用灭菌生理盐水加至总体积即为复合无菌液；

（4）将复合无菌液按规格要求直接灌封，冷冻保存。