[发明专利]一种新型冠状病毒抗体检测试纸、制备方法和应用

权利要求书

1.一种新型冠状病毒抗体检测试纸，包括底板和沿层析方向依次设置在底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫的一端与样品垫的一端接触，所述结合垫的另一端与硝酸纤维素膜的一端接触，所述硝酸纤维素膜的另一端与吸水垫接触，其特征在于，所述结合垫上包含SARS-Cov-2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体；所述硝酸纤维素膜上沿层析方向依次设置有检测线和质控线，检测线上喷涂有鼠抗人IgG单克隆抗体，以及质控线上喷涂有兔抗鸡IgY单克隆抗体。

2.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗体检测试纸，其特征在于，所述结合垫上包含胶体金标记的SARS-Cov-2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体。

3.根据权利要求1所述的一种新型冠状病毒抗体检测试纸，其特征在于，所述样品垫为玻璃纤维膜或聚酯纤维膜，所述结合物垫为玻璃纤维膜，所述底板为聚氯乙烯胶板。

4.一种制备新型冠状病毒抗体检测试纸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：柠檬酸三钠与氯化金三水化合物反应，得到胶体金；

步骤2：用步骤1制备的胶体金分别标记SARS-Cov-2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体；

步骤3：将标记好的SARS-Cov-2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体的重悬液混合，将结合垫浸入混合液中，然后取出结合垫并烘干；

步骤4：将硝酸纤维素膜粘贴于底板上，使其贴紧PVC底板，然后分别沿层析方向依次将鼠抗人IgG单克隆抗体和兔抗鸡IgY单克隆抗体横向喷涂在硝酸纤维素膜上的相应位置，分别作为检测线和质控线，最后烘干；

步骤5：将结合垫、样品垫和吸水垫粘接到底板相应位置上。

5.根据权利要求4所述的一种制备新型冠状病毒抗体检测试纸的方法，其特征在于，所述步骤1为：将氯化金加入去离子水中，加热至沸腾后加入柠檬酸三钠，当溶液变为紫红色后，持续加热10-20min至颜色不变，补加一定体积的去离子水，待其降至室温即可将得到胶体金溶液。

6.根据权利要求4所述的一种制备新型冠状病毒抗体检测试纸的方法，其特征在于，所述步骤2包括以下步骤：

(1)分别取出一定体积的胶体金溶液于洁净的第一离心管和第二离心管中，用K₂CO₃溶液将第一离心管中胶体金溶液的pH值调至10-11，用K₂CO₃溶液将第二离心管中胶体金溶液的pH值调至8-9，同时确保两个离心管中的胶体金溶液不产生聚沉；

(2)在第一离心管中加入一定量的SARS-CoV-2重组N蛋白抗原，在第二离心管中加入一定量的鸡IgY单克隆抗体，分别将第一离心管和第二离心管混匀后反应20-40min；

(3)分别往第一离心管和第二离心管中加入一定量的10mM Tris溶液和5％酪蛋白钠盐，搅拌反应20-40min；

(4)将上述两个离心管进行离心，离心转速8000–9000r/min，离心时间为5-15min，分离得到胶体金标记的SARs-CoV-2重组N蛋白抗原和胶体金标记的鸡IgY单克隆抗体；

(5)分别取一定体积的20mM Tris和5％蔗糖充分重悬(4)中离心得到的胶体金标记的SARs-CoV-2重组N蛋白抗原和胶体金标记的鸡IgY单克隆抗体。

7.根据权利要求4所述的一种制备新型冠状病毒抗体检测试纸的方法，其特征在于，所述步骤3为将步骤2中得到的胶体金标记的SARS-Cov-2重组N蛋白抗原和鸡IgY单克隆抗体的重悬液混合，用混合后的重悬液充分浸泡结合垫，然后取出结合垫，42℃烘干4h，得到带显色检测试剂的干燥结合垫，保存于25℃干燥柜备用。

8.根据权利要求4所述的一种制备新型冠状病毒抗体检测试纸的方法，其特征在于，所述步骤4中的烘干温度为42℃，烘干时间为2h；所述步骤5中，结合垫的一端设置在样品垫和底板之间，硝酸纤维素膜的一端设置在结合垫和底板之间，硝酸纤维素膜的另一端设置在吸水垫和底板之间，相邻垫板之间相交1.5-2.5mm。