[发明专利]一种基于液相色谱-串联质谱同位素内标法测定香辛料中食源性兴奋剂的方法

说明书

本发明涉及食源性兴奋剂检测技术领域，尤其涉及一种基于液相色谱‑串联质谱同位素内标法测定香辛料中食源性兴奋剂的方法。本发明的方法包括如下步骤：(1)香辛料与内标液混合，得到混合液；(2)在混合液中加入提取液，混匀，离心取上清得到香辛料提取液；(3)香辛料提取液于OasisMCX固相萃取柱上进行净化处理，得到的洗脱液于39～41℃下氮吹干，复溶剂复溶，过膜，得到待测香辛料；(4)利用液相色谱‑串联质谱系统测定待测香辛料中兴奋剂的峰面积，根据标准曲线，计算得到香辛料中食源性兴奋剂的含量。此方法能同时检测内源性甲乌药碱和曲托喹酚，并且准确灵敏。

技术领域

本发明涉及食源性兴奋剂检测技术领域，尤其涉及一种基于液相色谱- 串联质谱同位素内标法测定香辛料中食源性兴奋剂的方法。

背景技术

食源性兴奋剂是指来源于食品中的兴奋剂，依据来源可划分为内源性及外源性兴奋剂。部分食品中天然存在兴奋剂成分，这些成分于动植物体内天然存在或产生，即内源性兴奋剂成分，比如去甲乌药碱和曲托喹酚均为四氢异喹啉类生物碱，该类生物碱在自然界分布广泛，主要分布在木兰科、樟科、马兜铃科、毛茛科、小檗科、防己科、罂粟科等数10种植物类群中。

目前关于曲托喹酚的检测仅见关于人体尿液的研究报道。对于去甲乌药碱检测研究报道较多，检测基质有生物样品、中草药、植物性样品和膳食补充剂。对于香辛料中去甲乌药碱的检测近年开始有了一些研究，主要包括液相色谱-电化学法、液相色谱-串联质谱法。液相色谱-电化学法虽然可消除复杂样品中的大部分非电活性物质的干扰，但是灵敏度差，无法满足监测需求。液相色谱-串联质谱法大多采用基质标准曲线外标法对化合物进行定量，而去甲乌药碱为内源性药物，对于某些阳性基质样品难以配制空白基质标准曲线从而无法实现对化合物的准确定量。还有少数的液相色谱-串联质谱法采用内标法对化合物进行测定，但是其方法中的净化方式会对去甲乌药碱有一定吸附，极易造成检测数据不准确的现象发生。现有技术并未发现一种灵敏、准确的能同时检测香辛料样品中去甲乌药碱和曲托喹酚的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种灵敏、准确的能同时检测香辛料样品中去甲乌药碱和曲托喹酚的方法。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种基于液相色谱-串联质谱同位素内标法测定香辛料中食源性兴奋剂的方法，包括如下步骤：

(1)香辛料与内标液混合，得到混合液；

(2)在混合液中加入提取液，混匀，离心取上清得到香辛料提取液；

(3)香辛料提取液于Oasis MCX固相萃取柱上进行净化处理，得到的洗脱液于39～41℃下氮吹干，复溶剂复溶，过膜，得到待测香辛料；

(4)利用液相色谱-串联质谱系统测定待测香辛料中兴奋剂的峰面积，根据标准曲线，计算得到香辛料中食源性兴奋剂的含量。

作为优选，香辛料与内标液的质量体积比为1g:49～51μL；

内标液为D4-去甲乌药碱和D9-曲托喹酚的混合液；

D4-去甲乌药碱的质量浓度为10ng/mL；

D9-曲托喹酚的质量浓度为10ng/mL。

作为优选，提取液的加入量与香辛料的体积质量比为9.5～10.5mL:1g；

提取液为0.4～0.6％甲酸乙醇溶液；

0.4～0.6％甲酸乙醇溶液中0.4～0.6％甲酸与乙醇的体积比为1:198～200。

作为优选，混匀的方式为均质混匀；

均质的转速为9000～11000r/min；

均质的时间为0.8～1.2min；