[发明专利]一种基于液相色谱-串联质谱同位素内标法测定香辛料中食源性兴奋剂的方法

权利要求书

1.一种基于液相色谱-串联质谱同位素内标法测定香辛料中食源性兴奋剂的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)香辛料与内标液混合，得到混合液；

(2)在混合液中加入提取液，混匀，离心取上清得到香辛料提取液；

(3)香辛料提取液于Oasis MCX固相萃取柱上进行净化处理，得到的洗脱液于39～41℃下氮吹干，复溶剂复溶，过膜，得到待测香辛料；

(4)利用液相色谱-串联质谱系统测定待测香辛料中兴奋剂的峰面积，根据标准曲线，计算得到香辛料中食源性兴奋剂的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，香辛料与内标液的质量体积比为1g:49～51μL；

内标液为D4-去甲乌药碱和D9-曲托喹酚的混合液；

D4-去甲乌药碱的质量浓度为10ng/mL；

D9-曲托喹酚的质量浓度为10ng/mL。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，提取液的加入量与香辛料的体积质量比为9.5～10.5mL:1g；

提取液为0.4～0.6％甲酸乙醇溶液；

0.4～0.6％甲酸乙醇溶液中0.4～0.6％甲酸与乙醇的体积比为1:198～200。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，混匀的方式为均质混匀；

均质的转速为9000～11000r/min；

均质的时间为0.8～1.2min；

离心的转速为9000～11000r/min；

离心的时间为4～6min。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，洗脱时的洗脱剂为4.5～5.5％氨水甲醇溶液；

4.5～5.5％氨水甲醇溶液中4.5～5.5％氨水与甲醇的体积比为1:18～20；

洗脱时洗脱剂的加入量与香辛料的体积质量比为1.8～2.2mL:1g。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，复溶剂为甲酸水溶液与甲醇的混合液；

甲酸水溶液的质量浓度为0.09～0.11％；

甲酸水溶液与甲醇的体积比为3.5～4.5:1；

复溶剂的加入量与香辛料的体积质量比为0.45～0.55mL:1g；

膜为有机滤膜；

有机滤膜的孔径为0.22μm。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，液相色谱-串联质谱系统中色谱条件为：色谱柱为2.1×100mm，1.7μm的Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱；流动相A为质量浓度为0.1％的甲酸水溶液；流动相B为甲醇溶液；流速为0.4mL/min；柱温为35℃；进样量为5μL；

梯度洗脱程序为0～0.5min，10％的流动相B；

0.5～3.5min，10～90％的流动相B；

3.5～5min，90％的流动相B；

5～5.01min，90～10％的流动相B；

5.01～7min，10％的流动相B。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，液相色谱-串联质谱系统中质谱条件为：电喷雾电离源ESI，反应监测模式为MRM；离子源温度为350℃；毛细管温度为250℃；加热模块温度为350℃；氮气流速：3.0L/min，干燥气流速：10.0L/min，加热气流速：10.0L/min。

9.根据权利要求1～8任意一项所述的方法，其特征在于，兴奋剂为甲乌药碱和/或曲托喹酚。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，甲乌药碱的标准曲线为Y＝3.19066X+0.181625，r＝0.99989；

曲托喹酚的标准曲线为Y＝0.906370X+0.0299261，r＝0.99994；

X表示：样品中所含兴奋剂的浓度与内标液中所含相应兴奋剂浓度的比值；

Y表示：样品中所含兴奋剂的峰面积与内标液中所含相应兴奋剂峰面积的比值。