[发明专利]一种利用低共熔溶剂裂解细胞并直接用于聚合酶链式扩增反应的方法

权利要求书

1.一种直接用于聚合酶链式扩增反应的细胞裂解液，其特征在于，包括如下步骤：

首先制备低共熔溶剂，然后将微量生物检材加入到低共熔溶剂中，在50℃-60℃温度中孵育，并且震荡10-20分钟后，取微量低共熔溶剂直接加入PCR扩增体系中，低共熔溶剂的量不超过扩增总体积的30％，检材与离子液体的质量比为1:99-1:50。

2.根据权利要求1所述的一种直接用于聚合酶链式扩增反应的细胞裂解液，其特征在于，所述低共熔溶剂由咪唑和烷基化羧酸以及水组成，该低共熔溶剂中的咪唑以带正电荷的状态存在，而烷基化羧酸具有溶解细胞膜脂质的特性，释放出的DNA可以特异性地与咪唑结合，将该混合物加入PCR体系后，由于PCR的反应缓冲液pH值通常为8-9，在该体系中咪唑发生去质子化，导致其与DNA的静电相互作用消失，DNA与咪唑脱离，并进行PCR反应。

3.根据权利要求1所述的一种直接用于聚合酶链式扩增反应的细胞裂解液，其特征在于，制备低共熔溶剂的组成与方法为，咪唑与烷基化羧酸的摩尔比1：2-2:1，在密闭条件下，温度60-80℃下强力搅拌，溶液变成澄清透明为止，再向该体系中加入不超过总体积20％的水，混合均匀即可。

4.根据权利要求1所述的一种直接用于聚合酶链式扩增反应的细胞裂解液，其特征在于，微量生物检材与低共熔溶剂的质量比优选1:90，加入PCR体系中的低共熔溶剂的体积优选为占PCR体积的20％。

5.根据权利要求3所述的一种直接用于聚合酶链式扩增反应的细胞裂解液，其特征在于，咪唑与烷基化羧酸的摩尔比优选1:2到1:1，水加入量优选10％。该低共熔溶剂的熔点低，粘度小。