[发明专利]一种ɑ-芋螺毒素MI-蛋白偶联抗原及其应用

权利要求书

1.一种α-芋螺毒素MI与牛血清白蛋白的偶联蛋白抗原，是通过炔基化修饰MI多肽与含叠氮乙酸修饰的BSA载体蛋白通过点击反应制备得到的；

所述炔基化修饰MI多肽的序列为：GRCCHPACGKNYSCGGK(Butynyl)-NH₂，C-端乙酰化修饰；所述Butynyl代表3-丁炔-1-氧羰基，修饰Lys(K)的侧链胺基；

所述含叠氮乙酸修饰的BSA载体的结构式如下式I所示：

式I中n为5～10。

2.权利要求1所述的α-芋螺毒素MI与牛血清白蛋白的偶联蛋白抗原的制备方法，包括下述步骤：

1)利用Fmoc-固相肽合成法合成炔基化修饰MI线性多肽，然后折叠形成含二硫键的炔基化修饰MI多肽；所述炔基化修饰MI多肽的序列为：GRCCHPACGKNYSCGGK(Butynyl)-NH₂，所述Butynyl代表3-丁炔-1-氧羰基，修饰Lys(K)的侧链胺基；

2)以二环己基碳二亚胺为缩合剂，使N-羟基琥珀酰亚胺、叠氮乙酸进行反应，得到叠氮乙酸琥珀酰亚胺活性酯，然后用所述活性酯对牛血清白蛋白BSA进行修饰获得含叠氮乙酸修饰的BSA载体；

3)在铜(I)催化作用下，使所述含二硫键的炔基化修饰MI多肽与含叠氮乙酸修饰的的BSA载体通过环加成反应偶联，得到所述α-芋螺毒素MI与牛血清白蛋白的偶联蛋白抗原。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤1)中，所述炔基化修饰MI多肽的制备方法如下：先合成MI-GGK(Butynyl)线性肽，然后在pH 8.0-8.2、0.1M乙酸铵缓冲溶液中折叠，折叠产物经C18反相高效液相色谱纯化，即得；

所述步骤2)中，所述BSA的分子量为66.4KD；所述BSA与所述活性酯的摩尔比为1：10-20；

上述方法步骤3)中，所述反应在氮气保护下进行；

所述炔基化修饰MI多肽与含叠氮乙酸修饰的BSA载体的摩尔比为10:1～20:1。

4.以权利要求1所述α-芋螺毒素MI与牛血清白蛋白的偶联蛋白抗原为免疫原制备的抗体。

5.根据权利要求4所述的抗体，其特征在于：所述抗体包括多克隆抗体和单克隆抗体，优选多克隆抗体；

所述多克隆抗体通过α-芋螺毒素MI与牛血清白蛋白的偶联蛋白抗原免疫动物获得；所述动物为哺乳动物。

6.由权利要求4或5所述抗体制备得到的抗体片段。

7.权利要求1所述的α-芋螺毒素MI与牛血清白蛋白的偶联蛋白抗原的应用；所述应用选自下述至少一方面：

1)在制备抗α-芋螺毒素MI血清中的应用；

2)在制备抗α-芋螺毒素MI抗体或其抗体片段中的应用；

3)在检测抗α-芋螺毒素MI抗体中的应用。

8.一种α-芋螺毒素MI酶联免疫试剂或试剂盒，包括权利要求4或5所述的抗体和/或权利要求6所述的抗体片段、以及权利要求1所述的α-芋螺毒素MI与牛血清白蛋白的偶联蛋白抗原。

9.权利要求4或5所述的抗体或权利要求6所述的抗体片段的应用，所述应用选自下述至少一方面：

1)在制备预防和/或治疗α-芋螺毒素MI或其类似物中毒的药物中的应用；

2)在制备检测α-芋螺毒素MI或其类似物的检测试剂盒或诊断试剂盒中的应用。

3)在检测α-芋螺毒素MI或其类似物中的应用。

10.一种α-芋螺毒素MI或其类似物的解毒剂，其活性成分为权利要求4或5所述的抗体或权利要求6所述的抗体片段。