[发明专利]一种蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽及其应用

说明书

本发明涉及化学分析定量检测技术领域，尤其涉及一种蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽及其应用。所述特征多肽的氨基酸序列为WDDYTYSWK，该特征多肽能够用来检测待测样品中蝮蛇蛇毒磷脂酶A2的含量，检测方法为：取氨基酸序列为WDDYTYSWK的蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽，制成系列浓度对照品溶液；取待测样品，酶解，取酶解后的上清液作为供试品溶液；分别注入液相色谱‑质谱仪，选择双电荷632.4→624.0作为定量离子对对待测样品中的蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽的含量进行检测，可以大大提高蝮蛇蛇毒药物的质量控制水平，对蝮蛇蛇毒、中间体及其药物制剂的质量控制均有很好地指导作用。

技术领域

本发明涉及化学分析定量检测技术领域，尤其涉及一种蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽及其应用。

背景技术

蛇毒是由蛇的毒腺分泌的一种复杂混合物，含有多种蛋白质、多肽、核苷、酶类、金属离子和其它小分子物质。以蛇毒为原料，分离纯化具有独特药理活性的单一成分是新药研发的热点。目前，已从乌苏里蝮蛇（Gloydius ussuriensis)、短尾蝮蛇（Gloydius brevicaudus）、哈里氏蝮蛇(Gloydius halys)、日本蝮蛇（Gloydius blomhoffii）等蝮蛇的蛇毒中分离出了类凝血酶、降纤酶、神经生长因子、精氨酸脂酶、L-氨基酸氧化酶和磷脂酶A2等成分。

蛇毒磷脂酶A2 (snake venom PLA2s，svPLA2s)是一类脂解酶的超家族，主要催化甘油磷脂sn-2位点的酯键水解，生成脂肪酸(花生四酸酯)和溶血磷脂。svPLA2s具有广泛毒性效应，包括肌毒性、心毒性、神经毒性、肾、肝毒性和全身出血等损伤，还可诱导炎症介质、血管舒张和血管收缩介质的释放，如前列腺素、组胺、血小板活化因子、儿茶酚胺、多巴胺、一氧化氮和内皮素。

目前以蛇毒为原料开发上市的药物多达十几种，其中以白眉蝮蛇（乌苏里蝮蛇亚种）的蛇毒为原料的上市药物就有注射用白眉蛇毒血凝酶、纤溶酶注射液、降纤酶注射液等多个品种，在这些药物中磷脂酶A2作为杂蛋白，会导致神经毒性等多种不良反应，必须严格控制其含量。因此，在这些药物的生产过程中监测蛇毒、工艺中间体及终产品的蛇毒磷脂酶A2的含量，对于优选原料、优化工艺、提高产品安全性有重要意义。但目前报道的蛇毒磷脂酶A2检测方法主要为凝胶电泳法和效价测定法，测定方法繁琐且准确性差，无法准确表征蛇毒及其提取物的质量。因此建立一种方便快捷，定量准确的蛇毒磷脂酶A2检测方法，以表征蛇毒及其提取物的质量具有广泛的社会效益和经济效应。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的发明目的是提供一种蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽。

本发明的另一发明目是提供上述蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽的应用，所述特征多肽可以大大提高蝮蛇蛇毒药物的质量控制水平，对蝮蛇蛇毒、中间体及其药物制剂的质量控制均有很好地指导作用。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

一种蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽，氨基酸序列为WDDYTYSWK。

优选地，所述蝮蛇为乌苏里蝮蛇（Gloydius ussuriensis)、短尾蝮蛇（Gloydius brevicaudus）、哈里氏蝮蛇(Gloydius halys)、日本蝮蛇（Gloydius blomhoffii）。

一种上述蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽在控制蝮蛇蛇毒、中间体或药物制剂质量方面的应用。

进一步地，上述应用采用以下步骤：