[发明专利]一种蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽及其应用

权利要求书

1.一种蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽的应用，其特征在于，所述蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽在控制蝮蛇蛇毒、中间体或药物制剂质量中的应用；其中，所述特征多肽的氨基酸序列为WDDYTYSWK，所述蝮蛇为乌苏里蝮蛇、短尾蝮蛇、哈里氏蝮蛇或日本蝮蛇；

所述应用采用以下步骤：

（1）取蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽，溶解并稀释制成系列浓度对照品溶液；

（2）在待测样品中加入胰蛋白酶进行酶解预处理，灭活后取上清液，作为供试品溶液；

（3）取步骤（1）所述的对照品溶液和步骤（2）所述的供试品溶液分别注入液相色谱-质谱仪，采用电喷雾正离子模式，进行多反应监测，以质荷比双电荷632.4→624.0作为定量离子对，以质荷比双电荷632.4→962.7作为定性离子对；

所述液相色谱-质谱仪中液相和质谱检测条件中，质谱条件为：电喷雾离子源，正离子扫描模式，多反应监测；涡旋离子喷雾温度500 ℃；离子化电压5.0 kV；碰撞室出口电压10V；入口电压EP 10 V；碰撞能量CE均为45 V，去簇电压DP均为60 V；

所述液相色谱-质谱仪中液相和质谱检测条件中，液相条件为：Agilent Poroshell120，SB-C18色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）；柱温：40 ℃；进样量：10 μL；流速：0.3 mL/min；流动相A为0.1%甲酸溶液，B为0.1%甲酸乙腈，进行梯度洗脱，洗脱程序：0→2 min，流动相A 85%；2→6 min，流动相A 85%→60%；6.1→8 min，流动相A 30%；8.1→10 min，流动相A85%；

（4）提取离子对双电荷632.4→624.0色谱图，以系列浓度对照品溶液中特征多肽的浓度为横坐标，以对应的峰面积为纵坐标，计算线性回归方程，r0.99，根据回归方程计算供试品溶液浓度，计算出待测样品中蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽的含量，进而控制待测样品的质量。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽检出限为2 ng/mL，定量限为5 ng/mL。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（1）的具体操作为：称取蝮蛇蛇毒磷脂酶A2特征多肽10 mg，用25 mmol/L 碳酸氢铵溶液溶解并稀释至100 mL，用25 mmol/L碳酸氢铵溶液稀释制成浓度为5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、30 ng/mL、40 ng/mL、50 ng/mL系列浓度对照品溶液。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（2）所述具体操作为：称取待测样品10mg用25 mmol/L 碳酸氢铵溶液溶解并稀释至100 mL；精密量取1 mL，加1 mg/mL 胰蛋白酶溶液10 μL，37 ℃反应2小时，100 ℃灭活10分钟，放冷至室温，12000 rpm离心10分钟，取上清液作为供试品溶液。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的胰蛋白酶溶液为临用新配溶液。