[发明专利]一种治疗视网膜疾病的反义寡核苷酸组合及其应用

说明书

本申请公开了一种治疗视网膜疾病的反义寡核苷酸组合及其应用。本申请治疗视网膜疾病的反义寡核苷酸组合，包括至少两个促进PRPF 31基因表达的反义寡核苷酸，该反义寡核苷酸以PRPF 31基因pre‑mRNA的5’‑uORF、exon3、exon11或exon14为靶标位点；并且，反义寡核苷酸的主链采用2’‑MOE修饰和硫代磷酸骨架。本申请治疗视网膜疾病的反义寡核苷酸组合，在细胞内的稳定性好，能够更有效的促进PRPF 31基因表达，为视网膜色素变性，尤其是视网膜色素变性11型，的治疗提供了一种新的方案和途径。

技术领域

本申请涉及反义寡核苷酸技术领域，特别是涉及一种治疗视网膜疾病的反义寡核苷酸组合及其应用。

背景技术

视网膜色素变性(RP)是临床上常见的一种遗传性视网膜变性疾病，其发病率约为1/3000-1/7000；通常从中间边缘开始，向黄斑和视网膜中心蔓延，随后视野缩小，导致视野狭窄，最终导致失明，或在复杂情况下完全失明，典型症状包括夜盲症。目前每百万人中约有6.25人是视网膜色素变性11型(RP11)。视网膜色素变性11型由PRPF 31突变引起，为常染色体显性遗传，即单拷贝的杂合变异就会导致疾病表征，且致病突变中大部分为功能丧失型；说明具有正常功能的基因剂量不足是导致疾病的主要因素；因此，提高正常拷贝PRPF31的表达量是潜在的治疗途径。

前体mRNA(pre-mRNA)的剪接是指在剪接体的催化作用下，将基因初始mRNA中的内含子去掉并将外显子拼接的过程。在目前已发现的80多个RP致病基因中，有8个基因，即PRPF3、PRPF8、PRPF31、PRPF6、PRPF4、SNRNP200、RP9和DHX38，在全身广泛表达并与pre-mRNA剪接相关；然而这些基因突变只引起眼部病变的机制尚不清楚，目前，也尚没有治疗视网膜色素变性的药物上市或者进入临床研究。

因此，如何有效治疗视网膜色素变性是本领域的研究重点和难点。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的治疗视网膜疾病的反义寡核苷酸组合及其应用。

本申请具体采用了以下技术方案：

本申请的第一方面公开了一种治疗视网膜疾病的反义寡核苷酸组合，包括至少两个促进PRPF 31基因表达的反义寡核苷酸，该反义寡核苷酸以PRPF 31基因pre-mRNA的5’-uORF、exon3、exon11或exon14为靶标位点；并且，反义寡核苷酸的主链采用2’-MOE修饰和硫代磷酸骨架。

需要说明的是，本申请的反义寡核苷酸组合是至少两个以PRPF 31基因pre-mRNA的5’-uORF、exon3、exon11或exon14为靶标位点设计的反义寡核苷酸为组合，配合使用。本申请研究显示，两个反义寡核苷酸为组合使用能够更好的促进PRPF 31基因表达，提高PRPF31基因表达量。并且，采用2’-MOE修饰和硫代磷酸骨架使得本申请的反义寡核苷酸在细胞内更稳定，且不影响反义寡核苷酸自身的效果。可以理解，本申请的反义寡核苷酸组合中，两个反义寡核苷酸都能够促进PRPF 31基因表达，在对基因表达促进效果要求较低的情况下，理论上本申请的两个反义寡核苷酸也可以单独使用；相应的，视网膜疾病的治疗效果可能会受影响。

本申请的一种实现方式中，至少两个促进PRPF 31基因表达的反义寡核苷酸中，至少一个为以5’-uORF为靶标位点设计的反义寡核苷酸，至少一个为以exon3、exon11或exon14为靶标位点设计的反义寡核苷酸。

需要说明的是，本申请的关键之一是，研究发现以5’-uORF为靶标位点设计的反义寡核苷酸能够更有效的促进PRPF 31基因表达；而以exon3、exon11或exon14为靶标位点设计的反义寡核苷酸可修复基因的无意义突变，协同增强PRPF31基因的表达；因此，本申请优选的技术方案中，反义寡核苷酸组合包括至少一个为以5’-uORF为靶标位点设计的反义寡核苷酸，以及至少一个为以exon3、exon11或exon14为靶标位点设计的反义寡核苷酸。