[发明专利]一种快速、精准定量绿茶中氮氧杂环类化合物的检测方法及绿茶干燥程度评价方法

权利要求书

1.一种快速、精准定量绿茶中氮氧杂环类化合物的检测方法，其特征在于，为一种金属浴辅助箭形固相微萃取技术结合气相色谱-三重四极杆串联质谱技术快速分析绿茶中氮氧杂环类化合物的检测方法，包括步骤：

（a）标准工作溶液的制备：

以2-甲基呋喃、2-正丁基呋喃、2-正戊基呋喃、呋喃醛、吡咯、乙酰吡嗪、乙酰吡咯的标准品为目标物，用乙醇定容配成20 mg/L的标准储备液，然后逐级稀释至5000 ng/mL、2000ng/mL、1000 ng/mL、500 ng/mL、300 ng/mL、100 ng/mL、50 ng/mL、20 ng/mL、10 ng/mL、5ng/mL，其中2-甲基吡嗪-d6内标浓度恒定为50 ng/mL的工作溶液备用；

（b）金属浴辅助箭形固相微萃取技术提取氮氧杂环类化合物

1）萃取纤维头老化：将萃取纤维头装入箭形固相微萃取手柄中，组成SPME Arrow手动进样器，插入温度为270℃的进样口老化30min钟后缩回纤维头，拔出进样口；

2）标准样准备：移取步骤（a）中的一系列不同浓度的工作溶液于20 mL顶空瓶中，用聚四氟乙烯密封帽拧紧；

待测样准备：准确称取1.0 g茶样于20 mL顶空瓶中，加入3950 μL蒸馏水和50 μL 4mg/L同位素2-甲基吡嗪-d6，保证体系里同位素内标物浓度为50 ng/mL，用聚四氟乙烯密封帽拧紧；

所述茶样的制备过程包括：

（I）茶鲜叶摊放：室内温度25℃-28℃，湿度70%-80%；

（II）滚筒式杀青：滚筒杀青机1、2、3组温度分别为280℃、275℃、275℃；

（III）揉捻：转速50-52 r/min，空揉5min-轻揉5min-松压2min-中压5min-重揉3min-空揉5min；

（IV）110℃、15 min烘毛火处理后，分别称重80g放于不锈钢筛盘中，然后置于箱式热风烘干机里在115℃条件下干燥5~50 min后取出，得到所述茶样；

3）氮氧杂环类化合物萃取：将步骤2）的顶空瓶放入金属浴中进行加热，在60℃的条件下，采用Carbon WR SPME Arrow纤维头刺穿隔膜于顶空瓶上方吸附30min；

4）样品解析：萃取完成后，将SPME Arrow萃取针插入GC进样口，200℃下解析4 min，进行气相色谱-三重四极杆串联质谱技术分析；

（c）气相色谱-三重四极杆串联质谱技术分析条件优化

色谱分离条件：色谱柱VF-WAXms，260℃，30 m×250 µm×0.25 µm；程序升温：初始柱温40℃，保持3min，以3℃/min升至120℃，保持2 min，然后再以10℃/min升至240℃，保持3min；载气：氦气，纯度99.999%；载气流速：1.0 mL/min；N₂碰撞气流速1.5 mL/min；He淬灭气2.25 mL/min；分流比：5:1；

内标物、2-甲基呋喃、2-正丁基呋喃、2-正戊基呋喃、呋喃醛、吡咯、乙酰吡嗪、乙酰吡咯的保留时间和质谱条件优化，优化后的多反应监测模式的参数情况如下：

其它质谱参数：传输线温度：250℃；离子源温度230℃；溶剂延迟：2 min；电离方式：EI源；电离能量：70 eV；Q2碰撞气：氮气，纯度≥99.999%；

（d）氮氧杂环类化合物的定性及定量分析

定性分析：依据各标准品的保留时间及特征离子峰；

采用内标法进行定量分析：采用步骤（a）的工作溶液，根据所选的特征定性离子和定量离子的信息，以目标化合物与内标的浓度比为横坐标，峰面积比为纵坐标进行线性回归分析，得到标准工作曲线；在相同的条件下，通过将待测样中目标挥发物的峰面积与内标峰面积的比值代入相应的标准工作曲线中计算得出待测茶样中目标挥发物的含量。

2.根据权利要求1所述的检测方法，步骤（d）中，2-甲基呋喃的标准工作曲线为y=0.002239*x-1.448717*10^-4，R² = 0.9990，线性范围为10~1000 ng/mL。