[发明专利]一种生产硫酸软骨素裂解酶ABCI的食品级安全酵母菌及其应用

权利要求书

1. 一种重组毕赤酵母，其特征在于，所述毕赤酵母中表达了核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示的编码硫酸软骨素裂解酶ABCI的基因,以SEQ ID NO.2所示的序列为启动子，启动编码所述硫酸软骨素裂解酶ABCI的基因的表达。

2. 根据权利要求1所述的重组毕赤酵母，其特征在于，所述重组毕赤酵母菌以Pichia pastorisGS115，或Pichia pastoris KM71，或Pichia pastoris X33，或Pichia pastoris SMD1168为出发菌株。

3.根据权利要求1所述的重组毕赤酵母，其特征在于，所述重组毕赤酵母的表达载体包括pGAPZ系列和pGAPZα系列质粒。

4.根据权利要求3所述的重组毕赤酵母，其特征在于，利用pGAPZ系列质粒实现硫酸软骨素裂解酶ABCI的胞内表达，或利用pGAPZα系列质粒实现胞外表达。

5.一种生产硫酸软骨素裂解酶ABCI的方法，其特征在于，利用权利要求1~4任一所述重组毕赤酵母为发酵菌株，发酵生产硫酸软骨素裂解酶ABCI。

6. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将权利要求1~4任一所述重组酵母单菌落接种至YPD培养基，28~35℃、200~220 rpm培养14~18 h得到种子液，然后将种子液按培养基体积的5~10%添加至YPD培养基中，在28~35℃、200~220 rpm下培养不少于24 h。

7. 根据权利要求5所述的方法，其特征在于，将权利要求1~4任一所述重组毕赤酵母接种到含有YPD培养基中，28~35℃、200~220 rpm培养18~24 h，然后按培养基体积的5~10%转接至含有BSM培养基的发酵罐中发酵培养，在28~35℃，pH为4-6下发酵，控制溶氧大于30%。

8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将菌株在发酵罐中培养至OD₆₀₀大于50时，按照5~25 mL/h流加质量体积比为40~50%的甘油。

9.权利要求1~4任一所述重组毕赤酵母在生产硫酸软骨素裂解酶ABCI中的应用。

10.权利要求1~4任一所述重组毕赤酵母在制备包含硫酸软骨素二糖或硫酸软骨素四糖的产品中的应用。