[发明专利]一种同时检测三种猫腹泻病毒的三重PCR检测方法及其用途

权利要求书

1.一种同时检测三种猫腹泻病毒的引物组合，其特征在于，包括FAstV、FPV和FECoV的检测引物，具体引物序列如下：

FAstV-F：5’-CTGGAAGAGCTATGACACCATTG-3’，

FAstV-R：5’-CCATGAACGCAGAGAGCAAC-3’；

FPV-F：5’-TGGTTCTGGGGGTGTGGG-3’，

FPV-R：5’-GCTGCTGGAGTAAATGGC-3’；

FECoV-F：5’-CCAAAAGACGTGGTCGTTCTAA-3’；

FECoV-R：5’-GTTTTCTTCCAGGTGTGTTTGT-3’。

2.一种同时检测三种猫腹泻病毒的三重PCR检测方法，其特征在于，利用权利要求1所述的引物组合对FAstV、FPV和FECoV同时进行检测；

引物组合对中各引物的工作浓度比为：FAstV：FPV：FECoV＝0.8～1.4：0.8～1.4：0.8～1.4。

3.根据权利要求2所述的三重PCR检测方法，其特征在于，引物组合对中各引物的工作浓度比为：FAstV：FPV：FECoV＝0.8～1.2：0.8：0.8～1.2。

4.根据权利要求2所述的三重PCR检测方法，其特征在于，所述三重PCR的反应体系为：

FAstV、FPV和FECoV混合模板DNA 0.8～1.5μL，2×Taq PCR Master Mix 10～15μL，FAstV的上下游引物均为0.3～0.8μmol/L，FPV的上下游引物均为0.3～0.8μmol/L，FECoV的上下游引物均为0.3～0.8μmol/L，用ddH₂O补足至25μL。

5.根据权利要求4所述的三重PCR检测方法，其特征在于，所述三重PCR的反应体系为：

FAstV、FPV和FECoV混合模板DNA 1.5μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，FAstV的上下游引物均为0.5μmol/L，FPV的上下游引物均为0.4μmol/L，FECoV的上下游引物均为0.6μmol/L，用ddH₂O补足至25μL。

6.根据权利要求2所述的三重PCR检测方法，其特征在于，所述三重PCR的扩增程序为：

92～97℃预变性1.5～2.5min，90～97℃15～40s，45～60℃15～40s，70～75℃20～35s，共30～35个循环，最后70～75℃延伸8～15min；

进一步地，所述三重PCR的扩增程序为：95℃预变性2min，95℃30s，50～54℃30s，72℃30s，共35个循环，最后72℃延伸10min。

7.权利要求1所述的引物组合在制备用于猫星状病毒、猫细小病毒、猫肠道冠状病毒检测的试剂盒中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述试剂盒中，引物组合对中各引物的工作浓度比为：FAstV：FPV：FECoV＝0.8～1.4：0.8～1.4：0.8～1.4。

9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述试剂盒中，各引物的工作浓度为：FAstV的上下游引物均为0.5μmol/L，FPV的上下游引物均为0.4μmol/L，FECoV的上下游引物均为0.6μmol/L。

10.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述试剂盒在工作时的反应程序为：95℃预变性2min，95℃30s，50～54℃30s，72℃30s，共35个循环，最后72℃延伸10min。