[发明专利]一种基于肝卵圆细胞恶性化的原发性小鼠肝癌模型及其建立方法和应用

说明书

本发明涉及癌症动物模型建立技术领域，具体涉及一种基于肝卵圆细胞恶性化的原发性小鼠肝癌模型及其建立方法和应用。建立方法包括以下步骤：使用原癌基因转化肝卵圆细胞，获得肝癌干细胞；将肝癌干细胞原位移植到受体小鼠的肝脏，获得原发性小鼠肝癌模型；所述受体小鼠是经过X射线辐照处理的野生型小鼠。本方案针对现有原发性肝癌动物模型的局限，建立了模拟原发性肝癌整个发生发展自然过程的新型原发性模型，从而可以精确研究特定基因在原发性肝癌发生发展中的作用及机制，验证该基因是否能够作为一个有效治疗靶点。利用本方案的模型可以筛选潜在原发性肝癌治疗新靶标以及新药物，为研究开发出新型的治疗原发性肝癌的药物或者治疗方法创造条件。

技术领域

本发明涉及癌症动物模型建立技术领域，具体涉及一种基于肝卵圆细胞恶性化的原发性小鼠肝癌模型及其建立方法和应用。

背景技术

动物模型是研究人类疾病机制、鉴定治疗靶点及评估治疗方式和药物的重要工具之一，其中，原发性肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC，又称肝细胞性肝癌)的小鼠模型在研究原发性肝癌的发生发展机制研究中发挥了不可或缺的作用。小鼠因其遗传背景单纯，在生理上又与人类极为相似，且成本较低、周期较短、基因修饰技术更容易实现，因此，小鼠肝癌模型是研究人类肝癌发生机制、评估药物的重要和有效的动物模型。

目前常用的原发性小鼠肝癌模型有：致癌物诱发小鼠肝癌模型、基因修饰性(转基因)小鼠肝癌模型。致癌物诱发小鼠肝癌模型包括使用遗传毒性和非遗传毒性的致癌物来诱导小鼠致癌，小鼠的性别、年龄、品系和遗传背景对肝癌发生会产生较大的影响，成为使用该方法构建模型的瓶颈。基因修饰性小鼠肝癌模型与其他常用原发性肝癌动物模型相比，在研究特殊基因在原发性肝癌发生过程中的作用或不同基因间的相互作用，以及与肝脏特异性致癌物之间的关系中具有独特优势。然而传统的制备方式主要是通过重组基因敲入(Knock-in)或目的基因敲除(Knock-out)构建。现有的转基因原发性肝癌小鼠模型多采用过表达cMYC与其他基因进行联合构建，如TGF-β、PTEN、P53等，该方法的造模成本高、耗时长、成瘤率不均一，并且不易用于评价相关基因在肝癌发生和发展过程中的作用，进而限制了限制转基因原发性肝癌小鼠模型的用途和价值。因此，利用基因编辑技术研发建立能反映肝癌生物特性的、模拟肝癌肿瘤微环境的、易于获取的且经济适用的理想肝癌模型，对于探究肝癌发生的分子机制、癌症信号通路、新型生物标记物、靶向药物的开发等具有重要意义。

发明内容

本发明意在提供一种基于肝卵圆细胞恶性化的原发性小鼠肝癌模型的建立方法，以解决使用现有的原发性肝癌小鼠模型不能精确研究特定基因在肝癌发生发展过程中的作用机制的技术问题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种基于肝卵圆细胞恶性化的原发性小鼠肝癌模型的建立方法，包括以下依次进行的步骤：

S1：使用原癌基因转化肝卵圆细胞，获得肝癌细胞；

S2：将肝癌细胞原位移植到受体小鼠的肝脏，获得原发性小鼠肝癌模型；所述受体小鼠是经过X射线辐照处理的野生型小鼠。

本方案还提供了一种基于肝卵圆细胞恶性化的原发性小鼠肝癌模型的建立方法制备获得的原发性小鼠肝癌模型。

本方案还提供了原发性小鼠肝癌模型在评价基因在肝癌发生和发展过程中的作用中的应用；原发性小鼠肝癌模型在评价具有治疗肝癌功效的药物中的应用；原发性小鼠肝癌模型在筛选原发性肝癌治疗靶点中的应用。

采用上述技术方案的原理以及有益效果：