[发明专利]单细胞分析

权利要求书

1.一种用于对具有感兴趣表型的单细胞进行基因分型的方法，所述方法包括：

-提供多个储库，和

a)对于多个储库，针对各个储库提供至少一种条形码序列和至少一种染料，其中所述至少一种条形码序列与所述至少一种染料的颜色和浓度相关，并获取阵列的图像，从而为各个储库映射所述至少一种染料的所述颜色和强度；和

b)对于多个储库，针对各个储库提供至少一个单细胞并针对各个储库在所述至少一个单细胞上进行表型测定，并获取图像，从而为各个储库映射所述至少一个单细胞的所述表型；

其中步骤a)在步骤b)之前进行或者步骤b)在步骤a)之前进行；然后

c)对于多个储库，针对各个储库将在步骤b)中获得的所述单细胞的表型与在步骤a)中获得的所述至少一种染料的所述颜色和所述强度联系起来；和

-对于多个储库，针对各个储库将所述至少一个单细胞的核酸逆转录以获得用所述至少一种条形码序列条形码化的单细胞cDNA，所述至少一种条形码序列与所述至少一种染料的所述颜色和浓度相关；和

-将所述基因型与所述至少一个单细胞的所述表型联系起来。

2.根据权利要求1所述的微流体方法，其中所述方法还包括选自以下的至少一个步骤：

-至少一个清除步骤，

-对于多个储库，针对各个储库提供至少一种寡核苷酸，其中所述至少一种寡核苷酸包含引物序列，

-对于多个储库，针对各个储库将所述至少一种条形码序列附接至所述至少一种寡核苷酸，

-对于多个储库，针对各个储库提供裂解组合物，

-对于多个储库，针对各个储库裂解所述至少一个单细胞，

-对于多个储库，针对各个储库提供逆转录酶和逆转录酶组合物，

-对于多个储库，针对各个储库将所述单细胞核酸的至少一些与至少一种条形码化的寡核苷酸杂交，

-回收所述条形码化的单细胞cDNA，

-从所述条形码化的cDNA中除去未掺入的寡核苷酸，

-扩增所述条形码化的单细胞cDNA，

-对所述条形码化的单细胞cDNA进行测序。

3.根据权利要求1或2所述的微流体方法，其中所述方法是包括提供微粒体装置的步骤的微流体方法，所述微流体装置包含芯片，所述芯片包含至少一个微流体通道和多个储库。

4.根据权利要求3所述的微流体方法，其中，针对各个储库，在单细胞液滴中提供所述至少一个单细胞。

5.根据权利要求3或4所述的微流体方法，其中，针对各个储库，在RT液滴中提供所述逆转录酶、所述逆转录酶组合物和所述至少一种寡核苷酸。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的微流体方法，其中，对于多个储库，将所述至少一种条形码序列连接在所述多个储库的各个储库的表面上。

7.根据权利要求6所述的微流体方法，其中在转录前释放所述至少一种条形码序列。