[发明专利]甘松萜类化合物及其分离和在制备抗胰腺癌药物中的应用

说明书

本发明公开了甘松萜类化合物的结构及分离方法，并通过CCK‑8、诱导胰腺癌细胞凋亡实验发现，从甘松中分离出的天然甘松萜类化合物具有很好的抗胰腺癌活性，可作为活性成分用于制备治疗胰腺癌的药物。甘松萜类化合物的结构式如下：

技术领域

本发明涉及一种天然甘松萜类化合物及其分离方法，同时还涉及该甘松萜类化合物的抗胰腺癌生物活性及作为制备抗胰腺癌药物活性物质的应用，属于天然药物化学领域。

背景技术

胰腺癌（PC）被称为“癌中之王”，具有很高的侵袭性和致命性，是目前已知预后最差的恶性肿瘤之一。近年来，我国胰腺癌的发病率呈上升趋势，其死亡率居恶性肿瘤的前10位，5年生存率只有10%。胰腺癌患者中大约有80%-85%的患者无法手术切除或者已经发生转移，即使可以局部手术切除的患者，预后仍然很差，通过手术得到控制的患者只有10%~15%。药物治疗是胰腺癌治疗的主要手段之一，但由于耐药性和缺乏药物特异性，药物总体有效率不到20%。为了延长胰腺癌患者的生存期，迫切需要开发寻找更加安全有效的胰腺癌化疗药物。

天然产物作为药物的重要来源，在新药的发现和开发中发挥着重要的作用。60%以上的抗肿瘤药物与天然产物密切相关。虽然小分子靶向药物在癌症治疗中占主导地位。因此，寻找天然活性化合物，发现新型抗胰腺癌药物，有助于推动寻找高效抗胰腺癌药物。 甘松，中药名，为败酱科植物甘松Nardostachys jatamansi DC.的干燥根及根茎。理气止痛，开郁醒脾，外用祛湿消肿。有镇静、抗癫痫、抗抑郁、促神经生长、改善认知能力、保护心肌细胞、降血压、抑菌与抗疟、抗肿瘤等多种药理活性。

发明内容

本发明的目的是提供一种天然甘松萜类化合物及其分离方法；

本发明的另一目的是对上述分离的天然甘松萜类化合物的抗胰腺癌活性进行研究，以期用于制备治疗抗胰腺癌的药物。

一、天然甘松萜类化合物的分离

本发明天然甘松萜类化合物的分离，包括以下步骤：

（1）将干燥的甘松根及茎用甲醇室温提取3次，每次7天，提取液合并，蒸发浓缩至无醇味，得到总提取液；

（2）将总提取物用水分散后，分别用石油醚（60-90℃）、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚相、乙酸乙酯相、正丁醇相和水相；

（3）乙酸乙酯相通过硅胶柱色谱分离，石油醚-乙酸乙酯（10:1~0:1，v/v）梯度洗脱，得到九个组分Fr.1~Fr.9；组分Fr.3中有大量结晶，用石油醚洗涤，剩余部分通过硅胶柱分离并用石油醚-乙酸乙酯（10:1-0:1, v/v）梯度洗脱，得到十二个组分Fr.3.1~Fr.3.12；其中Fr.3.11通过硅胶柱纯化得到化合物2；

（4）组分Fr.4通过硅胶柱分离，石油醚-乙酸乙酯（10:1-1:1, v/v）梯度洗脱，得到九个组分Fr.4.1-Fr.4.9；其中组分Fr.4.3用 Sephadex LH-20凝胶分离并用二氯-甲醇（1:1, v/v）洗脱，得到三个组分Fr.4.3.1~Fr.4.3.3；Fr.4.3.2用C₁₈ 反相硅胶柱分离，甲醇/水（50:50~100:0，v/v）梯度洗脱，依次得到5个组分Fr.4.3.2.1~Fr.4.3.2.5；其中，Fr.4.3.2.2.1通过HPLC分离（甲醇/水= 50/50，流速10 mL/min）并再次用HPLC纯化（甲醇/水=55/45，流速10 mL /min），得到化合物6和化合物 1；

（5）组分Fr.4.4通过硅胶柱分离并用石油醚/丙酮（50:1-0:1，v/v）梯度洗脱，得到九个馏分Fr.4.4.1~Fr.4.4.9；Fr.4.4.4通过 ODS CC 分离并用甲醇/水（30%-100%，v/v）梯度洗脱，获得十四个组分Fr.4.4.4.1~Fr.4.4.4.12；其中Fr.4.4.4.10用甲醇洗涤并用氯仿重结晶得到化合物19；