[发明专利]一种评估实体肿瘤Claudin18.2蛋白表达的方法和应用

权利要求书

1.Claudin18.2蛋白在制备实体肿瘤诊断或预后评估的试剂盒中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒以Claudin18.2蛋白作为诊断或预后评估的标记物。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述实体肿瘤包括上皮来源的实体肿瘤。

4.根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于，所述试剂盒是通过免疫组化染色技术体外检测实体肿瘤患者手术切除组织中Claudin18.2蛋白的表达情况。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂盒包括如下试剂：

试剂A:Claudin18.2单克隆抗体×1；

试剂B:HRP标记的IgG二抗×1；

试剂C:PBS缓冲液×1；

试剂D:抗原修复液×1；

试剂E:3％过氧化氢溶液×1；

试剂F:山羊血清封闭液×1；

试剂G:DAB浓缩液×1；

试剂H:DAB缓冲液×1；

试剂I:苏木素染液×1；

其中，所述Claudin18.2单克隆抗体可以特异性结合实体肿瘤细胞上的Claudin18.2抗原。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述免疫组化染色技术包括脱蜡、抗原修复、内源性过氧化物酶失活、封闭、一抗孵育、二抗孵育、DAB显色、复染、脱水、封片和镜检的步骤。

7.一种评估实体肿瘤Claudin18.2蛋白表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将Claudin18.2蛋白的质控、高表达、低表达、中表达和阴性对照切片，与实体肿瘤的待检测切片一起进行免疫组化染色，镜下观察并机器采集图像；

(2)采用免疫组化分析软件分析上述图像，如所述Claudin18.2蛋白质控对照切片、阴性对照切片的染色无假阳性或假阴性，用上述软件分别获取待检测切片和上述质控、高表达、低表达、中表达和阴性的对照切片Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值作为强度指标，阳性细胞比例作为占比指标，

(3)结合步骤(2)中强度指标按照如下标准进行打分，具体为：待检测切片的染色强度以对照切片的平均灰度值为判定标准，0表示待检测切片平均灰度值低表达对照切片平均灰度值；1+表示低表达对照切片平均灰度值≤待检测切片平均灰度值中表达对照切片平均灰度值；2+表示中表达对照切片平均灰度值≤待检测切片平均灰度值高表达对照切片平均灰度值；3+表示待检测切片平均灰度值≥高表达对照切片平均灰度值；

同时使用免疫组化分析软件如Image J获取待检测切片的阳性细胞占比值，综合待检测切片的强度指标和占比指标进行Claudin18.2蛋白表达结果判定，标准为：

若待检测切片的染色强度≥2+，且阳性细胞占比≥40％，认为实体肿瘤细胞膜中Claudin18.2蛋白呈阳性；

若待检测切片的染色强度2+，或阳性细胞占比40％，认为实体肿瘤细胞膜中Claudin18.2蛋白呈阴性。

8.根据权利要求7所述评估实体肿瘤Claudin18.2蛋白表达的方法，其特征在于，

所述Claudin18.2蛋白质控对照切片含有人正常胃粘膜上皮组织切片；

所述Claudin18.2蛋白高表达对照切片为Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值接近参照样本最高灰度值70％对应的实体肿瘤组织切片；

所述Claudin18.2蛋白中表达对照切片为Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值接近参照样本最高灰度值40％对应的实体肿瘤组织切片；

所述Claudin18.2蛋白低表达对照切片为Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值接近参照样本最高灰度值10％对应的实体肿瘤组织切片；

所述Claudin18.2蛋白阴性对照切片为参照样本中Claudin18.2蛋白染色的平均灰度值最低对应的实体肿瘤组织切片；

其中，所述参照样本为待检测实体肿瘤组织标本库中100例以上不同病人来源的肿瘤组织切片或组织芯片。