[发明专利]临近标记复合物、临近标记方法、分子间互作分析方法有效
| 申请号： | 202110995237.8 | 申请日： | 2021-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN113698496B | 公开（公告）日： | 2023-03-28 |
| 发明（设计）人： | 甘海云;文青;李欣然;周嘉琦 | 申请（专利权）人： | 中国科学院深圳先进技术研究院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N9/08;C12Q1/6804;G01N30/02 |
| 代理公司： | 北京市诚辉律师事务所 11430 | 代理人： | 范盈;李玉娜 |
| 地址： | 518055 广东省深圳*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 临近 标记 复合物 方法 分子 间互作 分析 | ||
1.一种临近标记复合物，其特征在于，包括蛋白A和抗坏血酸过氧化物酶的融合表达蛋白；
所述蛋白A的氨基酸序列为SEQ ID NO.1所示。
2.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的一种临近标记复合物。
3.如权利要求2所述的一种试剂盒，其特征在于，还包括生物素苯酚和过氧化氢。
4.一种临近标记方法，其特征在于，使用权利要求1所述的一种临近标记复合物对与目标蛋白互作的蛋白、DNA和RNA分子进行生物素标记。
5.一种临近标记方法，其特征在于，使用权利要求2或3所述的一种试剂盒对与目标蛋白互作的蛋白、DNA和RNA分子进行生物素标记。
6.如权利要求4所述的一种临近标记方法，其特征在于，所述临近标记复合物对与目标蛋白互作的蛋白、DNA和RNA分子进行生物素标记，具体包括：
向细胞中加入抗体孵育，使所述抗体与目标蛋白结合；
向细胞中加入所述临近标记复合物孵育，使所述临近标记复合物的蛋白A与所述抗体结合，使得所述细胞内形成抗坏血酸过氧化物酶-蛋白A-抗体-目标蛋白复合体；
向形成所述抗坏血酸过氧化物酶-蛋白A-抗体-目标蛋白复合体的细胞中加入生物素酚孵育；
加入过氧化氢激活所述抗坏血酸过氧化物酶利用所述生物素苯酚生成生物素-苯氧自由基对与所述目标蛋白互作的蛋白、DNA和RNA分子进行生物素标记。
7.如权利要求4所述的一种临近标记方法，其特征在于，所述临近标记复合物对与目标蛋白互作的蛋白、DNA和RNA分子进行生物素标记，具体包括：
将所述临近标记复合物与抗体孵育，使所述临近标记复合物的蛋白A与所述抗体结合，得到第一复合体；
向细胞中加入所述第一复合体孵育，使所述抗体与目标蛋白结合，使得所述细胞内形成抗坏血酸过氧化物酶-蛋白A-抗体-目标蛋白复合体；
向形成所述抗坏血酸过氧化物酶-蛋白A-抗体-目标蛋白复合体的细胞中加入生物素苯酚孵育；
加入过氧化氢激活所述抗坏血酸过氧化物酶利用所述生物素苯酚生成生物素-苯氧自由基对与所述目标蛋白互作的蛋白、DNA和RNA分子进行生物素标记。
8.如权利要求6或7所述的一种临近标记方法，其特征在于，所述目标蛋白为修饰的组蛋白。
9.如权利要求8所述的一种临近标记方法，其特征在于，所述生物素-苯氧自由基对所述目标蛋白20nm以内的蛋白、DNA和RNA分子进行生物素标记。
10.一种分子间互作分析方法，其特征在于，包括：
使用权利要求1所述的一种临近标记复合物对与目标蛋白互作的蛋白、DNA和RNA分子进行生物素标记；
使用偶联链霉亲和素的磁珠对生物素标记的蛋白、DNA和RNA分子进行富集；
通过LC-MS/MS、DNA-seq或RNA-seq或相对定量PCR方法将富集到的生物素标记的蛋白、DNA和RNA分子进行分析鉴定。
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