[发明专利]pAPN基因第16外显子的基因编辑系统及其应用

权利要求书

1.一种pAPN基因第16外显子的基因编辑系统，其特征在于，包括核酸内切酶和sgRNA对；

所述sgRNA对包括pAPN-sgRNA-1和pAPN-sgRNA-2；

编码pAPN-sgRNA-1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；

编码pAPN-sgRNA-2的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的基因编辑系统，其特征在于，所述核酸内切酶和sgRNA对的编辑载体包括编辑载体1和编辑载体2；

编辑载体1表达核酸内切酶和pAPN-sgRNA-1；

编辑载体2表达核酸内切酶和pAPN-sgRNA-2。

3.根据权利要求2所述的基因编辑系统，其特征在于，编辑载体1和编辑载体2的载体骨架独立地包括CRISPR质粒；

优选地，所述CRISPR质粒包括CRISPR/Cas9、CRISPR/Cas9n、CRISPR/Cpf1或CRISPR/C2c2，优选为CRISPR/Cas9；

优选地，所述CRISPR/Cas9质粒包括pX330、pX260、pX334、pX335、pX458、pX459、pX461、pX462、pX551或pX552，优选为pX458。

4.权利要求1-3任一项所述的基因编辑系统在修饰pAPN基因第16外显子或制备修饰pAPN基因第16外显子的产品中的应用。

5.一种猪pAPN基因第16外显子修饰的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任一项所述的基因编辑系统。

6.一种pAPN基因第16外显子修饰的细胞的制备方法，其特征在于，将权利要求1-3任一项所述的基因编辑系统转入目标细胞中，得到pAPN基因第16外显子修饰的细胞。

7.根据权利要求6所述的细胞的制备方法，其特征在于，所述细胞包括猪成纤维细胞，优选为猪胎儿成纤维细胞；

优选地，转入方法包括电穿孔法或脂质体转染法；

优选地，在基因编辑系统转入细胞后，还包括筛选和鉴定的步骤；

优选地，所述筛选为流式分选；

优选地，所述鉴定包括测序鉴定。

8.通过权利要求6或7所述的制备方法制备得到的细胞。

9.一种用于猪pAPN基因第16外显子修饰的方法，其特征在于，将权利要求8所述的细胞移植入去核的卵母细胞，得到重组克隆胚胎，将所述重组克隆胚胎移植入母体内经妊娠，获得pAPN基因第16外显子修饰的基因编辑猪；

或者通过显微注射的方法，将含有权利要求1-3任一项所述的基因编辑系统微注射到猪合子期胚胎中，得到pAPN基因修饰胚胎，将所述基因编辑胚胎移植入母体内经妊娠，获得pAPN基因第16外显子定点修饰的基因编辑猪。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，基因编辑猪出生后还包括鉴定的步骤；

优选地，所述鉴定包括测序鉴定。