[发明专利]一种用纳米磁珠提取核酸的试剂盒及提取方法

说明书

本发明涉及一种用生物纳米磁珠法提取DNA的试剂盒及其提取方法，该试剂盒包括了裂解液，去抑制剂，洗涤液，洗脱液及磁珠。利用磁珠法操作简便且适用范围广的优点，用处理过的生物纳米磁珠在特定溶液环境中对核酸进行高特异性的吸附与结合，以便于裂解和分离蛋白质、多糖等生物大分子结构的杂质，从而提升结果核酸产物的产出及纯度。本发明的试剂盒适用于短片段DNA，且具有简易，安全，成本廉价等优点。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种用纳米磁珠提取核酸的试剂盒及提取方法，一种简易便捷的纳米磁珠手动提取 DNA的核酸提取方法。

背景技术

核酸分为DNA和RNA，是生命形态组成中必不可少的基本单位，广泛存在于动植物细胞及微生物中。其中，DNA携带有合成RNA和蛋白质的必要遗传信息，是生命发展的机制和正常运作中最重要的大分子物质。

核酸提取技术是分子生物领域中最为基本且关键的一个环节，为后续的下游实验带来了获取目标基因，提供PCR复制模板并能用以建库的可能，为人们更好的了解生物分子结构并开发功能应用提供了基础。

核酸是酸性的大分子物质，参与了遗传信息表达，蛋白质反应合成等众多生物反应，是检测领域中不可或缺的一类基本物质。现有的核酸提纯分离主要是为了将核酸（DNA/RNA）与蛋白质，多糖，盐类等其他杂质经过试验步骤分离，得到纯化后的核酸分子。在尽量保证其内在结构的完整性不被损坏的前提下，尽可能排除其他污染，同时放大产出。常用方法包括氯仿抽提法，过离心柱法以及磁珠法等。大都需要经过裂解，分离及提纯洗涤等诸个步骤。

其中，磁珠法作为相对新发展起来的核酸提取方法，通过对纳米微珠颗粒的表面进行优化和修饰后，将其制成具备超顺磁性的硅羟基纳米磁珠。通过其表面化学官能基团的作用，可以与核酸分子在不同条件（溶液盐分及pH值的变化调控等）下形成具备特异性的吸附与结合，保留想要得出的纯净核酸成品并以解除吸附的方式再度分离出来。此方法可以避免使用氯仿等有毒的有机溶剂，同时也简化了部分手工操作，使得实施方法及试剂制备变得相对简化，同时为仪器高通量的全自动化流程提供了新的可能。

发明内容

本发明目的在于提供一种利用纳米磁珠提取核酸的试剂盒。

本发明的再一目的在于：提供一种上述试剂盒提取核酸的方法，通过提取核酸以达成应用于下游的扩增测序等后续研究的目的。

本发明目的通过以下方案实现：一种用纳米磁珠法提取DNA的试剂盒，包括了裂解液，去抑制剂，洗涤液，洗脱液及生物纳米磁珠，其中：

溶液Ⅰ：由10mM～100mM的Tris-Cl缓冲液,5mM～20mM的乙二胺四乙酸（EDTA）溶剂,0.5%～3.5%的去垢剂，200mM～300mM的胍盐组成；

溶液Ⅱ：由10mM～100mM的Tris-Cl，5mM～10mM的EDTA组成；

溶液Ⅲ：由质量浓度不低于75%的高纯度乙醇组成；

溶液Ⅳ：超纯水/去离子水；

所述的生物纳米磁珠为储存于NaCl缓冲溶液中的硅羟基纳米磁珠悬浮液。

其中，优选的，所述的Tris-Cl,EDTA溶剂为pH值≈7.4。

优选的，所述羟基纳米磁珠悬浮液为硅羟基超顺磁性纳米磁珠，四氧化三铁磁核，平均粒径1μm，储存于NaCl缓冲溶液中。

进一步的，所述的纳米磁珠悬浮液的浓度为25mg/ml。

所述的溶液Ⅰ中，所述胍盐为盐酸胍，所述去抑制剂为蛋白酶k，所述去垢剂为十二烷基硫酸钠（SDS）和聚乙二醇辛基苯基醚（Triton x-100）。

所述的溶液Ⅲ中，质量浓度不低于75%乙醇可选用无水乙醇代替，乙醇与磁珠悬浮混合溶液的体积比应为3:1。

本发明提供了一种利用上述试剂盒提取DNA的方法，包含以下步骤：