[发明专利]一种用纳米磁珠提取核酸的试剂盒及提取方法

权利要求书

1.一种用纳米磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，包括了裂解液，去抑制剂，洗涤液，洗脱液及生物纳米磁珠，其中：

溶液Ⅰ：由10mM～100mM的Tris-Cl缓冲液,5mM～20mM的乙二胺四乙酸（EDTA）溶剂,0.5%～3.5%的去垢剂，200mM～300mM的胍盐组成；

溶液Ⅱ：由10mM～100mM的Tris-Cl，5mM～10mM的EDTA组成；

溶液Ⅲ：由质量浓度不低于75%的高纯度乙醇组成；

溶液Ⅳ：超纯水/去离子水；

其中，生物纳米磁珠为储存于NaCl缓冲溶液中的硅羟基纳米磁珠悬浮液，四氧化三铁磁核。

2.根据权利要求1所述的用纳米磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，所述的Tris-Cl,EDTA溶剂为pH值≈7.4。

3.根据权利要求1所述的用纳米磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，所述羟基纳米磁珠悬浮液为硅羟基超顺磁性纳米磁珠，四氧化三铁磁核，平均粒径1μm，储存于NaCl缓冲溶液中。

4.根据权利要求1或3所述的用纳米磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，所述的纳米磁珠悬浮液的浓度为25mg/ml。

5.根据权利要求1所述的用纳米磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，溶液Ⅰ中，所述胍盐为盐酸胍，所述去抑制剂为蛋白酶k，所述去垢剂为十二烷基硫酸钠（SDS）和聚乙二醇辛基苯基醚（Triton x-100）。

6.根据权利要求1所述的用纳米磁珠法提取DNA的试剂盒，其特征在于，溶液Ⅲ中，质量浓度不低于75%乙醇为无水乙醇，乙醇与磁珠悬浮混合溶液的体积比应为3:1。

7.一种利用权利要求1至6任一项所述试剂盒提取DNA的方法，其特征在于，包含以下步骤：

1）将起裂解作用的溶液Ⅰ与去抑制剂，核糖核酸载体Carrier RNA和生物纳米磁珠悬浮液、待提取样品反应，在加热并得到充分裂解之后使磁珠与核酸吸附结合；

2）使用溶液Ⅱ、Ⅲ清洗混合吸附溶液，分离需要洗脱的蛋白，多糖杂质；

3）使用溶液Ⅳ清洗并使核酸脱离吸附，得到纯化后的样品。

8.根据权利要求7所述的提取方法，其特征在于，搭配生物纳米磁珠使用磁力装置，以促使磁珠与液体吸附悬浮。

9.根据权利要求8所述的提取方法，其特征在于，所使用的磁力装置为简易磁力架，用来放置样本与磁珠结合的缓冲溶液，辅助吸附分离清洗过程。

10.根据权利要求7至9任一项所述的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一.在1.5ml离心管中加入20-500μL的样本以及100-500μL的溶液Ⅰ，20-100μL去抑制剂，1-5μL Carrier RNA和10-30μL硅羟基纳米磁珠悬浮液，轻微震荡混匀后，置于55-60℃温浴10-30分钟；

步骤二. 往离心管加入250-500μL溶液Ⅱ，充分混匀，将试管静置于磁力架上，放置2-3分钟，待磁珠与核酸吸附，吸弃上清液；和/或者，

步骤三. 往离心管加入150-500μL溶液Ⅲ，轻微震荡混匀，静置于磁力架上2-3分钟，吸弃上清液； 和/或者，

步骤四：加入溶液Ⅲ，并重复上述步骤三；

步骤五：加入50-150μL溶液Ⅳ，混匀并简易离心后，于55-60℃温浴10-20分钟，再置于磁力架上，静置2-3分钟，吸取溶液，弃磁珠，得成品，妥善储存。