[发明专利]一种抗菌和抗病毒的猪血红蛋白β链C端片段、表达该片段的枯草芽孢杆菌、制剂以及应用

说明书

本发明提供一种抗菌和抗病毒的猪血红蛋白β链C端片段，所述片段的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.6所示；本发明还提供表达上述抗菌和抗病毒的猪血红蛋白β链C端片段的枯草芽孢杆菌、含上述猪血红蛋白β链C端片段的制剂和应用。本发明所制备的含有猪血红蛋白β链C端片段根据其活性变化确定出最佳多肽片段，并将其串联形成的。本发明所示猪血红蛋白β链C端片段，抗病毒活性为8.16*10supgt;4/supgt;U/ml，抗细菌活性：抑菌圈直径为13.47±0.67mm。本发明含有猪血红蛋白β链C端片段枯草芽孢杆菌喷干粉剂对猪病毒性腹泻和细菌性腹泻腹泻均具有显著的治疗效果。

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种抗菌和抗病毒的猪血红蛋白β链C端片段、表达该片段的枯草芽孢杆菌以及应用。

背景技术

在国民经济发展中，生猪养殖业占据的地位日益重要，既关系到人们的日常生活，对养殖场所在地的经济发展也具有一定的推动作用。近年来，猪场疫病越来越复杂，主要存在以猪蓝耳病、猪圆环病毒病、猪链球菌病和副猪嗜血杆菌病等多病原混合感染现象，发病率高，成活率低，造成严重经济损失。

血红蛋白是在大多数动物血管内专门负责运输氧气的蛋白，属于呼吸蛋白大家族之一，广泛存在于所有的脊椎动物和大多数非脊椎动物的红细胞中，功能研究比较透彻。脊椎动物体内的血红蛋白为四条链构成，两条相同的α链以及两条相同的β链，每一条链均只有一个环状血红素分子组成，每一个血红素的结构相同：均由4个吡咯环构成，在吡咯环中心有一个铁原子。氧气能够结合在铁原子上，并且随血液运输到机体的各个组织发挥作用。血红蛋白的最重要的作用是运输氧气，在缺氧的各个组织中，血红蛋白能够发生构象变化，释放氧气，而在肺部等氧气充足的组织器官中有能够将结合氧气，血红蛋白通过构象变化快速的将氧气从血液运输到全身各个器官。

血红蛋白肽是一种具有很高生物活性的肽，其分子量小，稳定性高，氨基酸平衡，目前血红蛋白肽在抗菌方面的研究进展主要包括对威胁动物机体健康的病原菌进行清除和消灭。我国研究人员分离了人的血红蛋白及其各个片段，并进行了体外抗菌能力检测和研究，并对血红蛋白动物机体抑菌活性研究，结果证实人血红蛋白α、β链及其片段均有抗菌活性。此外，血红蛋白肽具有调节抗病毒天然免疫应答的功能，能够抑制仙台病毒、新城疫病毒、水泡性口炎病毒和猪流行性腹泻病毒的复制。

目前猪血红蛋白肽制备方法均是以猪血为原料，采用水解法和微生物发酵法进行制备现有技术制备的猪血红蛋白肽，存在以下不足：猪血红蛋白肽的抗菌抗病毒的性能较差；产量小；猪血红蛋白肽在制备成猪血红蛋白肽制剂时，会降低其活性；猪血红蛋白肽的结构、理化性质及功能性质稳定性差。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供一种抗菌和抗病毒的猪血红蛋白β链C端片段、表达该片段的枯草芽孢杆菌以及应用，实现以下发明目的：筛选得到猪血红蛋白β链C端片段，抗菌和抗细菌活性高；该片段转入枯草芽孢杆菌后，发酵液中猪血红蛋白β链C端片段的浓度达到120mg/L以上，产量高；含猪血红蛋白β链C端片的发酵液制备得到的猪血红蛋白β链C端片段产品，活性保持率高；猪血红蛋白肽的结构、理化性质及功能性质稳定性好。

为解决上述技术问题，本发明采取以下技术方案：

一种抗菌和抗病毒的猪血红蛋白β链C端片段，所述片段的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO.6所示。

以下是对上述技术方案的进一步改进：

所述片段的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO.3所示。

一种表达所述抗菌和抗病毒的猪血红蛋白β链C端片段的枯草芽孢杆菌，所述枯草芽孢杆菌的菌种保藏号为CCTCC NO：M 2020837。

所述表达所述抗菌和抗病毒的猪血红蛋白β链C端片段的枯草芽孢杆菌的制备方法为将pHT01-P43-HBB重组载体转入枯草芽孢杆菌感受态中得到；