[发明专利]提高中药多糖得率并调节皮肤屏障及免疫的枯草芽孢杆菌

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CCFM1162，于2021年06月07日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：61715，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼。

2.一种发酵中药原料及提取发酵多糖的方法，其特征在于，所述方法的具体步骤如下：

（1）将权利要求1所述的枯草芽孢杆菌CCFM1162接种至以中药原料为唯一碳源的培养基中进行发酵，得到发酵液；

（2）超声处理步骤（1）中的发酵液，离心并收集发酵上清液；在发酵上清液中加入三氯乙酸，孵育后离心并收集上清液；在上清液中加入乙醇，孵育后离心获得沉淀；

（3）用超纯水复溶步骤（2）中的沉淀后，真空冷冻干燥，获得发酵多糖粉末；所述中药原料为石斛且发酵多糖为石斛多糖，或所述中药原料为黄芪且发酵多糖为黄芪多糖。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，培养基的组成包括干重40~80g/L的中药原料，10~40 g/L的增殖因子和10~40 g/L的无机盐；所述中药原料为石斛或黄芪。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述中药原料的制备方法为将新鲜或干燥的中药原料粉碎至60目以下；所述增殖因子选自酵母浸粉、酵母提取物、酵母蛋白胨、胰蛋白胨或大豆蛋白胨中的一种或多种；所述无机盐选自氯化钠、无水乙酸钠、柠檬酸氢二铵、磷酸氢二钾中的一种或多种；所述中药原料为石斛或黄芪。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，枯草芽孢杆菌的接种量为1.0×10⁶~1.0×10⁷ cfu/mL；发酵的条件为：温度为32~38℃，pH为5.5~7.0，发酵时间为15~24h。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，超声处理的条件为：温度25~80℃，超声功率200~500 w，时间为10~30 min。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，三氯乙酸的浓度为750~850 g/L，以质量比2%~5%的添加量添加至发酵上清液中，孵育时间为30~60 min，温度为0~4℃；乙醇的浓度为90~95%，孵育时间为12~16 min，温度为0~4℃。

8.利用权利要求2~7任一所述方法制备得到的含石斛多糖的组合物或含黄芪多糖的组合物。

9.权利要求8所述含石斛多糖的组合物或含黄芪多糖的组合物在制备预防或治疗皮肤屏障修护和/或皮肤免疫调节的产品中的应用。