[发明专利]一种检测侵袭性曲霉菌感染的时间分辨荧光免疫层析试纸及其制备方法

说明书

本发明提供了一种检测侵袭性曲霉菌感染的时间分辨荧光免疫层析试纸及其制备方法，属于体外诊断试剂技术领域。本发明提供的时间分辨荧光免疫层析试纸是基于捕获法检测原理进行检测。采用本发明提供的试纸对血液中的微量曲霉菌抗体进行检测，实现10μl的血清、血浆或全血样本即可完成检测，并且检测时间较短，在10～15分钟内获得检测结果，能够及时对曲霉菌的感染是否为侵袭性感染做出判断，及时指导用药。同时所述试纸可以实现现场检测，及时发现，医护人员及非医护人员均可操作，普及性强。

技术领域

本发明属于体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种检测侵袭性曲霉菌感染的时间分辨荧光免疫层析试纸及其制备方法。

背景技术

曲霉菌(Aspergillus)属于丝状真菌，是一种常见的条件致病性真菌，引起人类疾病常见的曲霉菌包括烟曲霉菌和黄曲霉菌。曲霉菌广布自然界，可寄生于正常人的皮肤和上呼吸道，为条件致病菌。一般正常人对曲霉菌有一定的抵抗力，不引起疾病。曲霉菌病大多为继发性，当机体抵抗力降低时，病原菌可经皮肤黏膜损伤处或吸入呼吸道，进而进入血液循环到其他组织或器官而致病。因此，能够及时检测曲霉菌是否已发展成为侵袭性感染，及时对症用药对病人的健康恢复起到至关重要作用。

目前已有的检测手段为采用酶联免疫法，但该方法检测周期长，通常为1～2小时，操作复杂，需要专业技术人员操作，试剂保存条件通常为冷藏，不易储存运输等缺点。目前尚无采用时间分辨免疫层析技术的产品或文献发表。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种检测侵袭性曲霉菌感染的时间分辨荧光免疫层析试纸及其制备方法，具有检测时间短、操作简便的特点。

本发明提供了一种检测侵袭性曲霉菌感染的时间分辨荧光免疫层析试纸，包括底板和从下到上依次粘附在所述底板上的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述硝酸纤维素膜上包括质控线C和检测线T，所述结合垫上喷涂有曲霉菌抗原标记的时间分辨荧光微球溶液；所述质控线C包被有鼠抗曲霉菌抗体；所述检测线T包被有抗人IgG抗体。

优选的，所述曲霉菌抗原标记的时间分辨荧光微球溶液的制备方法，包括以下步骤：

1)向洗涤的时间分辨荧光微球溶液依次添加N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)进行活化反应，分离沉淀经洗涤后分散，得到活化时间分辨荧光微球溶液；

2)将活化时间分辨荧光微球溶液稀释，滴加曲霉菌抗原溶液进行偶联反应，经封闭，分离沉淀，复溶，得到曲霉菌抗原标记的时间分辨荧光微球溶液。

优选的，所述时间分辨荧光微球溶液的质量浓度为0.8％～1.2％；

所述N-羟基琥珀酰亚胺或1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的添加终浓度独立为1～5mg/ml；

所述活化反应的时间包括25～35min。

优选的，步骤2)中所述活化时间分辨荧光微球溶液的稀释倍数为10～100倍。

优选的，所述活化时间分辨荧光微球溶液的体积和曲霉菌抗原的质量比为1ml：2～5μg；

所述曲霉菌抗原溶液的浓度为0.01～0.1mg/ml；

所述滴加的速度为1～5s/滴；每滴液的体积为30～50μl。

优选的，所述曲霉菌抗原标记的时间分辨荧光微球溶液在结合垫上的喷涂量为0.1～3μl/cm。

优选的，所述鼠抗曲霉菌抗体或鼠抗人IgG抗体的包被浓度独立为0.1～3mg/ml。

优选的，所述鼠抗曲霉菌抗体由曲霉菌抗原免疫小鼠制备得到。

优选的，所述样品垫经过处理液浸泡处理后干燥得到；