[发明专利]一种鉴别东北鼢鼠的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种鉴别东北鼢鼠的试剂盒，其特征在于，它包括检测待检物种的如下3个SNP位点中任意一个或多个的试剂：

12S rRNA基因中的SEQ ID NO:5所示保守motif序列的第21位，SEQ ID NO:6所示保守motif序列的第4位；

16S rRNA基因中的SEQ ID NO:7所示保守motif序列的第25位。

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂是同时检测所述3个SNP位点的试剂；

或，所述SNP位点的碱基如下：

12S rRNA基因中的SEQ ID NO:5所示保守motif序列的第21位为G，SEQ ID NO:6所示保守motif序列的第4位为C；

16S rRNA基因中的SEQ ID NO:7所示保守motif序列的第25位为A。

3.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂为：测序用试剂、KASP方法用试剂或限制性片段长度多态性方法用试剂。

4.如权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，它还包括扩增12S rRNA基因和/或16SrRNA基因保守motif序列的试剂；所述保守motif序列为SEQ ID NO:5～7所示的任意一个或多个序列。

5.如权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述扩增12S rRNA基因保守motif序列的试剂包括SEQ ID NO:1～2所示的引物对；所述扩增16SrRNA基因保守motif序列的试剂包括SEQ ID NO:3～4所示的引物对。

6.一对引物对，其特征在于，它是序列如SEQ ID NO:3～4所示的引物对。

7.扩增12S rRNA基因和/或16S rRNA基因保守motif序列的试剂在鉴别东北鼢鼠的试剂盒中的用途，所述保守motif序列是SEQ ID NO:5～7所示的任意一个或多个序列；

优选地，所述试剂包括SEQ ID NO:1～2所示的引物对和/或SEQ ID NO:3～4所示的引物对。

8.一种鉴别东北鼢鼠的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取待检鼢鼠样本的基因组总DNA；

(2)检测如下3个SNP位点中任意一个或多个，分析即可：

12S rRNA基因中的SEQ ID NO:5所示保守motif序列的第21位，SEQ ID NO:6所示保守motif序列的第4位；

16S rRNA基因中的SEQ ID NO:7所示保守motif序列的第25位；

优选的，步骤(1)所述的样本为组织样本或血液样本。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述检测的步骤如下：

1)以步骤(1)提取的DNA为模板，利用扩增试剂进行PCR扩增得到扩增产物；

2)对步骤1)所得PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测；

3)对步骤2)的检测结果中在490bp有明亮条带的12S rRNA基因PCR扩增产物和/或1450bp左右的明亮条带的16S rRNA基因PCR扩增产物进行测序，得到12S rRNA和/或16SrRNA基因序列；

4)对步骤3)得到的12S rRNA基因序列和/或16S rRNA基因序列中的如下3个SNP位点中的一个或多个进行分析：12S rRNA基因序列中的SEQ ID NO:5所示保守motif序列的第21位，SEQ ID NO:6所示保守motif序列的第4位；16S rRNA基因序列中的SEQ ID NO:7所示保守motif序列的第25位；

优选地，步骤1)所述扩增试剂包括SEQ ID NO:1～2所示的引物对和/或SEQ ID NO:3～4所示的引物；所述的PCR扩增的退火温度52～56℃；步骤3)所述测序为双向Sanger测序。

10.如权利要求8或9所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述检测是同时检测所述3个SNP位点；

或，所述SNP位点的碱基如下，则待检鼢鼠为东北鼢鼠：

12S rRNA基因中的SEQ ID NO:5所示保守motif序列的第21位为G，SEQ ID NO:6所示保守motif序列的第4位为C；

16S rRNA基因中的SEQ ID NO:7所示保守motif序列的第25位为A。