[发明专利]一种尿液缬氨酸的检测试剂盒及检测方法

说明书

一种尿液缬氨酸的检测试剂盒及检测方法，属于生物化学检测技术领域。本发明涉及的试剂盒由以下试剂组成：试剂A：PBS缓冲液；试剂B：支链氨基酸转氨酶，NADH；试剂C：复合酶；试剂D：高碘酸钠；试剂E：缬氨酸标准液。本发明利用生物复合酶催化缬氨酸发生特异性显色反应，目前实验证明，除了维生素C外，还没有尿液中其它常见物质的干扰，结果准确可靠。另外试剂符合环保要求，对环境没有污染；对人体基本无毒性，使用相对安全。

技术领域

本发明涉及生物化学检测领域，具体涉及一种尿液缬氨酸的检测试剂盒及检测方法。

背景技术

缬氨酸是组成蛋白质的20种氨基酸之一，化学名称为2-氨基-3-甲基丁酸，属于支链氨基酸，也是人体必需的8种氨基酸和生糖氨基酸，它与其他两种高浓度氨基酸(异亮氨酸和亮氨酸)一起工作促进身体正常生长，修复组织，调节血糖，并提供需要的能量。在参加激烈体力活动时，缬氨酸可以给肌肉提供额外的能量产生葡萄糖，以防止肌肉衰弱。它还帮助从肝脏清除多余的氮(潜在的毒素)，并将身体需要的氮运输到各个部位。在正常个体中其含量相对稳定，而在肿瘤患者体液中，缬氨酸含量与健康人相比会有比较大的差异，近年来，越来越多的代谢组学研究表明，体液代谢产物可作为早期发现或检测多种肿瘤进程的标志物，尿缬氨酸浓度大于2.5mmol/L为异常，判断为阳性。医学研究发现，鼻咽癌、卵巢癌、宫颈癌、大肠癌患者的尿缬氨酸阳性率约80～85％，肝癌、胃癌患者的尿缬氨酸阳性率约70％。以尿液中的缬氨酸作为恶性肿瘤标志物，可应用于早期癌症筛查，且取材方便，无创伤，适合大规模推广。体液代谢产物同样可以作为早期发现和监测多种肿瘤进程的标志物，肿瘤病人尿液中酚类代谢物排出量增加。

在缬氨酸的研究中，以血清中缬氨酸及其代谢产物的研究相对较多，而对人体尿液中缬氨酸研究相对较少。血清肿瘤标志物存在操作繁琐，成本高，有创性，早期检出率不高等缺点。因此，探索缬氨酸含量的分析新技术并应有于尿液样品测定，对癌症的辅助诊断、治疗和监测具有十分重要的临床意义。

近年来对氨基酸代谢尤其是缬氨酸的体液检测研究有许多技术成果，但是其检测的反应原理基本上是依托于Millon反应原理或硝化反应原理，结果会产砖红色螯合物，以此对缬氨酸进行一个定性的检测。虽然这些方法在应用中有一定的价值和效果，但仍有如下不足之处：

(1)准确度受到一定限制，上述技术方法容易受尿液颜色、尿中蛋白、还原性物质、酸碱度以及无机盐影响或干扰。

(2)安全性差且不环保，汞是有毒的化合物，可通过呼吸道、皮肤或消化道等不同途径侵入人体，集聚于肝、肾、大脑等部位，且具有累积性，造成神经性中毒和深部组织病变；废弃的汞盐会污染环境，并能通过食物链在生物体内富集，进而进入人体，汞盐若处理不当，对人体以及环境都有极大的危害。

(3)不方便，由于试剂的腐蚀性和挥发性，所以目前产品常用安瓿瓶盛装试剂，但对消费者而言开启困难而且容易产生外伤事故。

发明内容

针对上述检测试剂的不准确、不安全、不环保、不方便的不足，本发明提供一种尿液缬氨酸的检测试剂盒及检测方法，具有操作简捷，性能稳定，特异性强的优点。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

一种尿液缬氨酸的检测试剂盒，其特征是，包括试剂A：0.1mol/L P BS缓冲液，pH6.6-7.0；试剂B：浓度为800U/mL-1700U/mL的缬氨酸支链氨基酸转氨酶，浓度为0.2-1mg/mL的NADH；试剂C：复合酶，组成为：浓度为900-1500LU/L的多酚氧化酶，浓度为300U/mL-700U/mL的抗坏血酸氧化酶，浓度为0.01mg/mL-0.12mg/mL的酶稳定剂；试剂D：质量浓度为0.05-0.22％的高碘酸钠；试剂E：浓度为0.10μmol/mL的缬氨酸标准液。

进一步的，试剂A的配制方式为称取磷酸二氢钾13.5g，磷酸氢二钠14.3g，取容器加蒸馏水到1L，调pH到6.6-7.0得到试剂A。