[发明专利]一种用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶及其制备方法与应用，所述用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶按照质量份数计，由乳酸氧化酶4～6份、核糖核酸内切酶4～7份、脱氧核糖核酸内切酶2～4份、人血清白蛋白1～2份、谷胱甘肽1～2份、硫酸亚铁铵2～3份、连氮二铵盐造影剂1～2份组成，本纳米药物的制备方法简单，通过聚合可以控制重复单元数，两种聚合物的用量比和浓度都可调，可方便调节硼替佐米药物的负载量，本纳米药物除了可通过硼替佐米进行化疗外，还可进行光热治疗和光声成像，各部分之间协同作用，为肿瘤治疗过程的实时诊断提供指导。

技术领域

本发明涉及纳米药物制剂技术领域，具体是一种用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶及其制备方法与应用。

背景技术

近年来，靶向纳米药物由于其靶向能力强、毒副作用低等优点，被广泛的发展并应用于肿瘤治疗。羟基磷灰石是人体牙齿的主要成分，具有优良的生物相容性、生物安全性和酸性响应的特点。因此，本文采用羟基磷灰石作为纳米载体，设计制备载药羟基磷灰石纳米材料用于靶向肿瘤治疗。通过调控羟基磷灰石纳米材料合成过程的条件及参数，制备载药羟基磷灰石DOX@HAP。进一步分别采用GGT酶靶向荧光染料、多肽cRGD和透明质酸三种靶向肿瘤标志物的分子对羟基磷灰石纳米材料进行表面修饰，从而构建3种靶向肿瘤的纳米药物用于肿瘤治疗。(1)GGT酶靶向纳米药物DDHAP：肿瘤标志物γ-谷氨酰转肽酶(GGT)是一种在大部分的肿瘤细胞膜表面过量表达的糖蛋白。本论文设计合成了一例GGT酶靶向荧光染料DFA1，并将其通过氢键作用修饰到纳米药物表面，构建GGT酶靶向纳米药物DDHAP。纳米药物通过染料DFA1靶向识别GGT酶后进入肿瘤细胞，在肿瘤微酸环境中释放药物。比率荧光成像实现了对药物释放过程的动态实时监测。该纳米药物在细胞、组织、小鼠肿瘤模型实验中，对GGT酶过表达的肿瘤细胞及组织中具有显著治疗效果。(2)cRGD靶向-核酸结合型纳米药物cRDHAP：环肽cRGD与肿瘤标志物整合素αvβ3具有高度亲和能力。化疗药物阿霉素的作用机制为嵌入细胞核抑制DNA及RNA的合成。本论文设计合成了一例RNA结合荧光染料Na-RNA，并将染料、PEG-cRGD和PEG依次修饰到纳米药物表面，构建了cRGD靶向-核酸结合型纳米药物cRDHAP。纳米药物通过cRGD识别整合素αvβ3后进入肿瘤细胞，在肿瘤微酸环境中脱除PEG并释放负载药物。纳米药物表面的染料Na-RNA与细胞核内RNA反应，提高纳米药物在细胞核内的累积量，增强化疗效果。该纳米药物在整合素αvβ3过表达肿瘤细胞的小鼠抑瘤模型中，抑瘤效果显著。(3)寡透明质酸修饰复合纳米药物oHA-DOX@MSNs/HAP：透明质酸与肿瘤标志物CD44蛋白具有结合作用，该结合作用的强弱与透明质酸的分子量大小有密切联系。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶及其制备方法与应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶及其制备方法与应用，所述用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶的制备方法包括以下步骤：

1，使用乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合酶液的制备：按照质量份数依次称取乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶；将称取的乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合并搅拌均匀，得到混合液；将混合液置于超声装置中进行超声分散，得到混合酶液，备用；

2，进行人血清白蛋白的制备：进行健康人静脉血的采集；从采集的血液中提取总RNA合成总cDNA；以cDNA为模板，采用PCR技术扩增人血清白蛋白基因，通过重组工程宿主细胞表达，即可得到人血清白蛋白，备用；其中，所述重组工程宿主细胞为酵母菌、CHO细胞、植物、昆虫、细菌或者动物细胞，所述人血清白蛋白通过质粒DNA载体表达、病毒载体表达、或转基因技术转移到植物和动物体内表达；