[发明专利]一种用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶的制备方法，其特征在于，所述用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶的制备方法包括以下步骤：

1，使用乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合酶液的制备：按照质量份数依次称取乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶；将称取的乳酸氧化酶、核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸内切酶进行混合并搅拌均匀，得到混合液；将混合液置于超声装置中进行超声分散，得到混合酶液，备用；

2，进行人血清白蛋白的制备：进行健康人静脉血的采集；从采集的血液中提取总RNA合成总cDNA；以cDNA为模板，采用PCR技术扩增人血清白蛋白基因，通过重组工程宿主细胞表达，即可得到人血清白蛋白，备用；其中，所述重组工程宿主细胞为酵母菌、CHO细胞、植物、昆虫、细菌或者动物细胞，所述人血清白蛋白通过质粒DNA载体表达、病毒载体表达、或转基因技术转移到植物和动物体内表达；

3，使用人血清白蛋白与谷胱甘肽进行还原型人血清白蛋白的制备：将步骤二制备得到的人血清白蛋白经阳离子交换层析得到初级产物，将初级产物经阴离子交换层析，过膜进行除菌，即可得到还原型人血清白蛋白，备用；其中，所述阳离子交换层析的条件为：使用平衡缓冲液以60～220cm/h的流速平衡层析柱，所述平衡缓冲液组分为15～25mMNaAc，25～30mM NaCl，0.4～1mM EDTA-2Na，还原型谷胱甘肽，pH为5.0；所述阴离子交换层析条件为：使用平衡缓冲液以60～220cm/h的流速平衡层析柱，所述平衡缓冲液的组分为30～60mM磷酸盐，1～6mM EDTA-2Na，还原型谷胱甘肽，电导为2.5～9mS/cm，pH为6.1～7.9；

4，将混合酶液与硫酸亚铁铵进行混合制备复合纳米酶：将制备的混合酶液与硫酸亚铁铵进行混合，搅拌均匀得到混合物；在混合物中滴加去离子水，搅拌均匀后对进行30～50min超声分散得到分散液；在氮气气氛下对分散液进行磁力搅拌；对搅拌后的分散液进行超滤离心，收集离心产物得到复合纳米酶，备用；

5，使用复合纳米酶进行用于肿瘤靶向的复合纳米酶的制备：将步骤三制备得到的复合纳米酶置于水浴加热装置中进行水浴加热；加热过程中对复合纳米酶进行磁力搅拌并在搅拌时添加连氮二铵盐造影剂；磁力搅拌结束后继续进行3～5min加热，结束搅拌，得到复合纳米酶液；将复合纳米酶液置于干燥箱内进行低温干燥，即可得到用于肿瘤靶向的复合纳米酶。

2.根据权利要求1所述的用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶的制备方法，其特征在于，步骤2中，所述从采集的血液中提取总RNA合成总cDNA，包括：对采集的血液进行离心，获取血液中的有核细胞，提取总RNA，并通过提取的RNA合成总cDNA。

3.根据权利要求1所述的用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶的制备方法，其特征在于，所述对采集的血液进行离心的转速为1300～1400r/min，离心温度为5～10℃，离心时间为15～20min。

4.根据权利要求1所述的用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶的制备方法，其特征在于，所述提取总RNA还包括：进行RNA检测并鉴定完整性。

5.根据权利要求1所述的用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶的制备方法，其特征在于，所述通过提取的RNA合成总cDNA，包括：通过反转录进行cDNA获取

6.根据权利要求1所述的用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶的制备方法，其特征在于，步骤5中，所述水浴加热的温度为35～40℃。

7.根据权利要求1所述的用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶的制备方法，其特征在于，步骤5中，所述低温干燥的温度为20～30℃，干燥时间为8～10h。

8.一种如权利要求1-7任一所述的用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶制备方法制备获得的沸石复合纳米酶，其特征在于，所述用于肿瘤靶向的沸石复合纳米酶按照质量份数计，由乳酸氧化酶4～6份、核糖核酸内切酶4～7份、脱氧核糖核酸内切酶2～4份、人血清白蛋白1～2份、谷胱甘肽1～2份、硫酸亚铁铵2～3份、连氮二铵盐造影剂1～2份组成。

9.如权利要求1-8任一项所述的肿瘤靶向的复合纳米酶的药物中的应用。