[发明专利]一种CGC杂化纳米复合物及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种CGC杂化纳米复合物及其制备方法和应用，所述CGC杂化纳米复合物即Con A‑GOx‑Casubgt;2/subgt;(POsubgt;4/subgt;)subgt;3/subgt;。在此复合物的基础上，本发明设计了一种大肠杆菌O157:H7的杂化纳米复合物比色检测体系及方法，实现了大肠杆菌O157:H7的可视化检测，且操作简便，检测特异性强，灵敏度高，其最低检测限为10CFU·mLsupgt;‑1/supgt;。在实际样品的检测中，所述检测方法的检测回收率也在93～102％之间，具有较高的准确性，不仅适于大肠杆菌O157:H7的现场快速检测，在其他病原菌或临床诊断的检测中也具有巨大应用潜力。

技术领域

本发明属于食源性病原菌检测技术领域。更具体地，涉及一种Con A-GOx-Ca₂(PO₄)₃(CGC)杂化纳米复合物及其制备方法和应用。

背景技术

大肠杆菌O157:H7作为最常见的食源性致病菌之一，广泛存在于肉、蛋和蔬菜中，其能导致人体出现严重的出血性腹泻、溶血性尿毒症、新生儿败血症或急性肾衰竭，甚至死亡。若能对大肠杆菌O157:H7进行及时准确的检测，则可以有效的减少其所带来的危害。因此，构建一种简单、快速、准确的检测大肠杆菌O157:H7的方法具有重要意义。

在食源性致病菌的检测方法中，比色生物传感器由于具有简单性和肉眼可识别性，常用于病原微生物的快速检测。而试纸条作为常见的比色传感器输出方式之一，被广泛应用于生物检测领域，与其他比色传感器信号输出方式相比，试纸条具有体积小、操作简单、易读取以及成本低等优点。Ge等人发现蛋白质等有机物质和磷酸盐能形成一种多孔花状、大比表面积的有机-无机纳米复合物。当酶或抗体作为有机-无机纳米复合物的有机成份时，与自由酶相比，具有优异的稳定性和酶活性，与自由抗体相比，具有优异的捕获能力。近年来，基于此类有机-无机纳米复合物的生物传感器在疾病诊断和检测中得到应用。中国专利CN108300758A公开了一种Hemin杂化纳米花及其制备方法和应用，但使用该方法检测大肠杆菌O157:H7时，需使用紫外分光光度计等测反应溶液的吸光度，仍不够便携，不适于现场快速检测。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一种具有特异性的Con A-GOx-Ca₂(PO₄)₃杂化纳米复合物及其制备方法和应用。所述Con A-GOx-Ca₂(PO₄)₃杂化纳米复合物能够与H₂O₂试纸条结合，通过发生显色反应，实现对食源性致病菌—大肠杆菌O157:H7的可视化快速检测。

本发明的第一个目的是提供一种Con A-GOx-Ca₂(PO₄)₃杂化纳米复合物。

本发明的第二个目的是提供一种Con A-GOx-Ca₂(PO₄)₃杂化纳米复合物的制备方法。

本发明的第三个目的是提供一种用于检测大肠杆菌O157:H7的杂化纳米复合物比色检测体系。

本发明的第四个目的是提供一种利用所述杂化纳米复合物比色检测体系检测大肠杆菌O157:H7的方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明首先提供了一种Con A-GOx-Ca₂(PO₄)₃杂化纳米复合物，是将伴刀豆球蛋白A(Con A)、葡萄糖氧化酶(GOx)及Ca²⁺离子溶于磷酸盐缓冲盐溶液(PBS)后，通过一锅法合成得到。