[发明专利]基于mRNA的针对冠状病毒的疫苗及其制备方法

说明书

本发明涉及医药领域，具体涉及基于mRNA的针对冠状病毒的疫苗及其制备方法，疫苗包括：脂质体包裹的mRNA‑RBD+NTD+RBD的疫苗；mRNA根据α病毒家族中委内瑞拉马脑脊髓炎病毒TC83的基因组设计而成；mRNA‑RBD+NTD+RBD包含了分泌信号肽，新冠肺炎刺突Spike蛋白基因受体结合区(RBD)+N端区(NTD)+受体结合区(RBD)+Foldon序列的基因；本发明通过使用一条mRNA能够表达冠状病毒的抗原，具有强免疫原性，既能减轻病人痛苦，又能够达到免疫效果。

技术领域

本发明涉及医药领域，特别涉及基于mRNA的针对冠状病毒的疫苗及其制备方法。

背景技术

冠状病毒是一个大型病毒家族，可引起普通感冒乃至中东呼吸综合征(MERS)、严重急性呼吸综合征(SARS)、COVID19等严重疾病。感染的常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气短和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。冠状病毒是一种在动物与人类之间传播的人畜共患病毒。详细调查结果显示，严重急性呼吸综合征冠状病毒是从果子狸传到人，中东呼吸综合征冠状病毒是从单峰骆驼传到人。除此之外，还有一些已知的冠状病毒在动物中传播，但尚未感染人类。新型冠状病毒SARS-CoV-2是以前从未在人类中发现的一种新冠状病毒毒株。SARS-CoV-2 引起的严重的传染性疾病COVID19。SARS-CoV-2具有好传染性高致死率的特点，截止 2021年5月，在全球范围内SARS-CoV-2已经引起1亿5千多万人感染，3百万多人死亡。且新冠病毒在持续变异中，并且已经变得更易传播、患者病况更严重、持续时间更长。2021 年出现的英国变种B.1.1.7、南非变种B.1.351、巴西变种P.1和印度变种B.1.617，都在局部地区引起疫情反弹。据现有数据预测，以新冠病毒为代表的冠状病毒很有可能成为一个长期存在、年度流行的病毒。有效的疫苗是应对冠状病毒感染的最佳手段。

SARS-CoV-2病毒感染过程，主要是Spike蛋白介导的血管紧张素转换酶2(ACE2)受体识别、细胞附着和融合。SARS-CoV-2病毒的Spike蛋白由N端的信号肽，S1亚基和S2亚基构成，S1亚基负责受体结合，S2亚基负责膜融合。S1亚基包含N端区NTD 和冠状病毒受体结合区RBD，其中RBD，主要负责病毒与受体的结合，S2亚基包含HR 域，包括HR1和HR2，与病毒融合密切相关。因此通过疫苗免疫接种产生抗体中和S1 亚基特别是冠状病毒受体结合区RBD，来阻断SARS-CoV-2病毒和ACE2受体结合，进而诱导的细胞融合，是阻断病毒感染及传播的有效方式。

脂质纳米颗粒LNP通过IV注射的给药方式，在雄性大鼠中，会引起中性粒细胞和单核细胞的增加，且观察到肝脏的微观变化与肝酶(ALT和AST)的轻度增加。在雌性猴子中，LNP诱导了很小和短暂的补体激活。LNP会诱导轻度至中度和可逆的促炎症反应。这些现象，可以通过降低剂量或降低给药频率来减轻LNP引起的免疫激活所产生的毒性。

现有新冠mRNA疫苗都采用了刺突蛋白S基因全长序列，表达蛋白分子量较大，抗原决定簇所占比例较低，表达、递呈的有效抗原分子较少，且不能有效兼顾不断发生的病毒基因突变，不利于疫苗快速升级换代。

因此，提供一种新的基于mRNA的针对冠状病毒的疫苗及其制备方法具有重要的现实意义。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了基于mRNA的针对冠状病毒的疫苗及其制备方法，通过使用一条mRNA能够表达分泌信号肽，冠状病毒受体结合区(RBD)+N端区(NTD)+受体结合区(RBD)+Foldon基因的序列，具有强免疫原性，既能减轻病人痛苦，又能够达到疫苗的免疫效果，同时发明能表达不同的新冠变异毒株的RBD区域结构蛋白，也可以制备多价疫苗对不同变异毒株起到保护效果。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了抗原片段，包括分泌信号肽，新冠肺炎的刺突Spike蛋白受体结合区(RBD)，N端区(NTD)，受体结合区(RBD)和Foldon序列基因。