[发明专利]基于mRNA的针对冠状病毒的疫苗及其制备方法

权利要求书

1.抗原片段，其特征在于，其具有如SEQ ID No.1所示的氨基酸序列。

2.编码如权利要求1所述的抗原片段的核酸分子。

3.如权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子具有如SEQ ID No.2所示的核苷酸序列。

4.重组表达载体，其特征在于，包括如权利要求2或3所述的核酸分子以及自复制载体。

5.如权利要求4所述的重组表达载体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤a：合成RBD+NTD+RBD基因片段；

步骤b：构建TC-83自复制载体；

根据α病毒家族的基因组获得自复制mRNA序列；所述自复制mRNA序列包含可编码α病毒自复制组件的基因，缺乏制造具有传染性的α病毒颗粒的结构蛋白的基因；将自复制mRNA序列构建到的质粒中做为模板扩增，通过合成获得所述TC-83自复制载体；

步骤c：制备重组质粒JCXH-106；

将上游携带ApaI、下游携带NotI的RBD+NTD+RBD基因插入TC-83复制载体的ApaI和NotⅠ酶切位点之间，得到重组质粒JCXH-106。

6.如权利要求1所述的抗原片段、如权利要求2或3所述的核酸分子、如权利要求4所述的表达载体、如权利要求5所述的制备方法制得的表达载体在制备预防冠状病毒的疫苗或制备治疗冠状病毒的药物中的应用。

7.疫苗，其特征在于，包括如权利要求1所述的抗原片段、如权利要求2或3所述的核酸分子、如权利要求4所述的表达载体、如权利要求5所述的制备方法制得的表达载体，以及药学上可接受的辅料；或

直接或间接由如权利要求1所述的抗原片段、如权利要求2或3所述的核酸分子、如权利要求4所述的表达载体、如权利要求5所述的制备方法制得的表达载体制得所述疫苗。

8.如权利要求7所述的疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤a：合成RBD+NTD+RBD基因片段；

步骤b：构建TC-83自复制载体；

根据α病毒家族的基因组获得自复制mRNA序列；所述自复制mRNA序列包含可编码α病毒自复制组件的基因，缺乏制造具有传染性的α病毒颗粒的结构蛋白的基因；将自复制mRNA序列构建到的质粒中做为模板扩增，通过合成获得所述TC-83自复制载体；

步骤c：制备重组质粒JCXH-106；

将上游携带ApaI、下游携带NotI的RBD+NTD+RBD基因插入TC-83复制载体的ApaI和NotⅠ酶切位点之间，得到重组质粒JCXH-106；

步骤d：将JCXH-106质粒用限制性内切酶切线性化；

步骤e：将线性化的JCXH-106质粒进行体外转录反应，对模板DNA进行降解，最后将7-甲基化鸟苷酸帽结构加至转录的mRNA的5’端；

步骤f：取mRNA与脂类混合，mRNA包裹进入LNP内，得到mRNA-LNP复合物，通过浓缩及换液至步骤e制得的制剂溶液，获得所述疫苗。