[发明专利]分离纯化带有至少两个组氨酸标签的蛋白质的方法

权利要求书

1.一种分离纯化带有至少两个组氨酸标签的蛋白质的方法，所述方法包括：使处于溶解状态的所述蛋白质与阳离子在含水溶液中接触，得到包含所述蛋白质的沉淀物；

其中，所述含水溶液的pH值在小于等于7.2的范围内，优选5.0-7.0，更优选在6.0-7.0的范围内；

所述阳离子选自以下中一种或多种：非H⁺的一价阳离子，Mg²⁺,Ca²⁺,Mn²⁺,Fe²⁺,和Co²⁺；

当所述阳离子选自非H⁺的一价阳离子时，所述阳离子在所述含水溶液中的浓度为10-400mmol/L，优选15-300mmol/L，更优选30-200mmol/L；

当所述阳离子选自Mg²⁺,Ca²⁺,Mn²⁺,Fe²⁺和Co²⁺时，所述阳离子的所述含水溶液中的浓度为1-80mmol/L，优选1.5-40mmol/L，更优选3-30mmol/L。

2.一种分离纯化带有至少两个组氨酸标签的蛋白质的方法，所述方法包括：

a)使处于溶解状态的所述蛋白质与第一浓度的阳离子在含水溶液中接触，得到包含所述蛋白质的沉淀物；

b)将所述沉淀物与上清液分离；

c)将分离的所述沉淀物与第二浓度的阳离子在含水溶液中接触，使得包含在所述沉淀物中的至少一部分所述蛋白质重新溶解；

其中，步骤a)和步骤c)中所述含水溶液的pH值各自独立地在小于等于7.2的范围内，优选5.0-7.0，更优选在6.0-7.0的范围内；

步骤a)和步骤c)中的所述阳离子各自独立地选自以下中一种或多种：非H⁺的一价阳离子，Mg²⁺,Ca²⁺,Mn²⁺,Fe²⁺,和Co²⁺；

在步骤a)中，当所述阳离子选自非H⁺的一价阳离子时，所述第一浓度为15-300mmol/L，优选30-200mmol/L，更优选80-120mmol/L；当所述阳离子选自Mg²⁺,Ca²⁺,Mn²⁺,Fe²⁺和Co²⁺时，所述第一浓度为1.5-40mmol/L，更优选3-30mmol/L；

在步骤c)中，当所述阳离子选自非H⁺的一价阳离子时，所述第二浓度为大于等于250mmol/L，优选大于等于400mmol/L，更优选大于等于600mmol/L，但是不超过1000mmol/L，更优选不超过800mmol/L，或者，所述第二浓度为小于等于30mmol/L，优选小于等于20mmol/L，更优选小于等于10mmol/L；

在步骤c)中，当阳离子选自Mg²⁺,Ca²⁺,Mn²⁺,Fe²⁺和Co²⁺时，所述第二浓度为大于等于35mmol/L，优选大于等于50mmol/L，更优选大于等于100mmol/L，但是不超过250mmol/L，更优选不超过200mmol/L，或者，所述第二浓度为小于等于2mmol/L，优选小于等于1mmol/L。

3.权利要求2所述的方法，进一步包括步骤d)：将步骤c)得到的上清液分离并将其中阳离子浓度调节到所述第一浓度范围内，使得该上清液中至少一部分所述蛋白质再次沉淀。