[发明专利]一种羔羊第四胃糖蛋白的提取分离纯化方法及其用途

说明书

本发明涉及一种羔羊第四胃糖蛋白的提取分离纯化方法及其用途，该方法首先将预处理的新鲜羔羊第四胃脱脂、氯化钠溶液超声波辅助提取，离心取上清液，减压浓缩、醇沉，Sevage试剂脱去游离蛋白，冷冻干燥得到粗糖蛋白粉末，再通过凝胶与阴离子交换柱层析分离纯化得糖蛋白，得率为1.67%，总糖含量为70.24%、蛋白质含量为16.39%、糖醛酸含量为4.12%；并用HPLC纯化得到高纯度的羔羊第四胃糖蛋白，纯度达到99.894%。通过本发明所述方法获得的羔羊第四胃糖蛋白经体外益生菌活性实验证实：具有促进青春双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种和粪肠球菌的肠道益生菌生长的作用。该方法具有工艺简单，操作方便，提取率高，纯度高，性质稳定，无需大量使用有毒溶剂，成本低、易于推广应用等优点。

技术领域

本发明涉及一种天然来源糖蛋白的开发和应用领域，尤其涉及一种羔羊第四胃糖蛋白的提取分离纯化方法及其用途。

背景技术

糖蛋白是由寡糖与多肽链共价链接形成的大分子复合物。糖蛋白广泛存在于动物、植物和某些微生物中，具有增强免疫调节、抑制肿瘤、抗氧化、抗菌、抗凝血等生物活性。

近年来，肠道益生菌与人类整体健康的关系越来越受到人们的关注。益生元，是可以喂养肠道微生物群，促进肠道益生菌生长的营养物质。肠道菌群通过发酵生成的次级代谢物糖肽、短链脂肪酸(SCFAs)、乳酸、丁酸和丙酸等活性物质被释放到血液循环中，不仅影响胃肠道，还影响其他远处器官。肽聚糖是也是一类具有肠道益生菌活性物质通过肠道菌群发酵的次级代谢物，可刺激先天免疫系统对抗病原微生物，促进胃肠道健康。

根据文献报道，肠道益生菌通过调节宿主黏膜与系统免疫功能或通过调节肠道内菌群平衡促进营养吸收，保持肠道健康。人体以及动物体内的益生菌主要有酵母菌、益生芽孢菌、丁酸梭菌、乳杆菌、双歧杆菌、放线菌等。青春双歧杆菌、德氏乳杆菌保加利亚亚种是人体肠道中重要的益生菌组成，粪肠球菌是人体的正常菌群。青春双歧杆菌主要栖息于大肠的下端，德氏乳杆菌保加利亚亚种大量栖息于中胃和小肠内。双歧杆菌是人和某些动物肠道中对机体有益的菌类，尽管其对机体健康影响的一些机制还不甚明确，但该菌对机体具有生物屏障作用、对肝脏的保护和抗癌作用、营养及提高免疫机能作用和预防疾病传染的作用均已得到充分的肯定。青春双歧杆菌主要栖息于大肠的下端，是严格厌氧菌，培养条件苛刻，生长十分缓慢，在肠道内或活菌制剂中存活率和生长速率较低，因此如果能用一些天然成分促进双歧杆菌的生长对人体健康具有重要的生理作用。

德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus)是乳杆菌属的模式种,在人和动物胃肠道微生态平衡有着重要的作用，在人体中的主要生理作用有：促进内消化酶的分泌和肠道蠕动，清除肠道垃圾，抑制腐败菌群生长；乳酸菌利用本身特有的酶类补助宿主帮助宿主消化上消化道中未消化的营养物质，帮助营养物质的进一步吸收，包括增加人体必需氨基酸，维生素，无机盐的吸收，同时通过产生某些酶修饰毒素受体，减少毒素和肠粘膜的结合，促进浸提健康；乳酸菌对人体致癌物亚硝酸有很高的吸收率，通过吸收肠中亚硝酸有效降低肠癌的发生。

粪肠球菌(Enterococcus faecalis,E.faecalis)属肠球菌科，肠球菌属，为革兰氏阳性过氧化氢阴性球菌，具有保护屏障功效，对胃液、肠液及胆盐具有较强耐受能力，可在肠道上皮细胞形成生物膜，保护肠上皮细胞免受有害物质侵袭；具有营养功效，其菌体含多种小肽，能促进氨基酸及残基的吸收，提高组织蛋白的合成。它还可产生具有广谱抗菌特性的细菌素，对假单孢菌、沙门菌有较好的抑制作用。