[发明专利]一种脂质体核酸疫苗佐剂及其制备方法

权利要求书

1.一种脂质体核酸疫苗佐剂，其特征在于，包括如下原料：辅助脂质、阳离子脂质、聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质；

辅助脂质为胆固醇、1，2-油酰基磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的任意一种；

聚羧基三甲胺乙内酯中性脂质为1，2-十八酰基-sn-甘油-聚羧基三甲胺乙内酯、胆固醇-聚羧基三甲胺乙内酯、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚羧基三甲胺乙内酯中的任意一种；

该脂质体核酸疫苗佐剂由如下步骤制得：

步骤A1，将原料溶于有机溶剂中，得到混合液a；

步骤A2，将混合液a采用减压旋蒸法除去有机溶剂，得到油膜；

步骤A3，将油膜加入分散液中，超声分散，得到脂质体悬液；

步骤A4，将脂质体悬液进行高压均质，得到脂质体核酸疫苗佐剂；

步骤A1中辅助脂质、阳离子脂质、聚羧基三甲基乙内酯的摩尔比为1：1：0.01-0.5；

步骤A1中有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇中的任意一种；

步骤A3中分散液为超纯水、去离子水、生理盐水、磷酸盐缓冲液中的任意一种；

步骤A4高压均质的压力为50-240MPa，过压次数为1-25次；

其中阳离子脂质由如下步骤制得：

步骤S1，将壳聚糖粉末、二氯甲烷搅拌溶解后，加入三乙胺，降温至0℃，滴加氯乙酰氯，常温下搅拌7-8h，经纯化，得到中间体1；

步骤S2，将中间体1、四氢呋喃搅拌溶解后，加入三甲胺，常温搅拌50-52h，浓缩，柱层析，得到阳离子脂质；

步骤S1中的壳聚糖粉末由如下步骤制得：

将壳聚糖溶解在醋酸溶液中，升温至35-42℃，加入酶制剂，酶解后，用透析膜进行透析，透析液经浓缩、喷雾干燥，得到壳聚糖粉末；

步骤S1中壳聚糖粉末、二氯甲烷、三乙胺、氯乙酰氯的用量比为0.5-0.55g：22-25mL：0.32-0.35mL：0.2-0.22mL；

步骤S2中中间体1、四氢呋喃、三甲胺的用量比为0.72-0.75g：42-45mL：1.8-2mL；

酶制剂为壳聚糖酶、纤维素酶、糖苷酶、脂肪酶中的任意一种，酶制剂的用量为壳聚糖质量的5％。

2.根据权利要求1所述的一种脂质体核酸疫苗佐剂的制备方法，其特征在于：包括如下制备步骤：

步骤A1，将原料溶于有机溶剂中，得到混合液a；

步骤A2，将混合液a采用减压旋蒸法除去有机溶剂，得到油膜；

步骤A3，将油膜加入分散液中，超声分散，得到脂质体悬液；

步骤A4，将脂质体悬液进行高压均质，得到脂质体核酸疫苗佐剂；

步骤A1中有机溶剂为二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇中的任意一种；步骤A3中分散液为超纯水、去离子水、生理盐水、磷酸盐缓冲液中的任意一种；步骤A4高压均质的压力为50-240MPa，过压次数为1-25次。