[发明专利]一种滑膜间充质干细胞的悬浮液及其制备方法

说明书

本发明公开了一种滑膜间充质干细胞的悬浮液及其制备方法，属于医学制造技术领域。它包括以下步骤：(1)预处理：取滑膜间充质干细胞的商品化包装细胞；(2)培养：将步骤(1)中滑膜间充质干细胞进行扩增培养，并获取传代培养后的细胞；(3)悬浮液的制备：将步骤(2)中传代培养后的细胞转移至处理液中处理，即得。涉及的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，工艺简单、易于制作，有利于提高滑膜间充质干细胞的悬浮稳定性。

技术领域

本发明属于医学制造技术领域，具体地说，涉及一种滑膜间充质干细胞的悬浮液及其制备方法。

背景技术

间质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是指来源于间质组织，具有高度增殖和多向分化潜能的克隆细胞。大量研究证实，MSCs具有向脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞及肌细胞等的定向分化能力，在组织工程和再生医学等领域日益显现出广阔的应用前景。

同时由于其具有优越的成软骨分化潜能，被认为是软骨损伤修复最理想的种子细胞。但间质干细胞的相关研究较少，对其生物学特征及可能存在的作用知之甚少。目前，可利用小鼠的滑膜间充质干细胞进行模拟实验研究。例如中国发明专利，申请号：CN201810155580.X，公开号：CN108456655A，公开了一种间充质干细胞悬浮液及其制备方法与应用，其技术方案如下：“获取间充质干细胞原代细胞；间充质干细胞原代细胞的培养扩增：间充质干细胞原代细胞培养5-10天后换成无血清DMEM营养液，至细胞65～75％融合，移去培养上清液，然后添加第一消化液，消化0.5-2min，细胞收缩后加入所移去的培养上清液中和后进行离心分离，重新加入完全培养基重悬，按照1传1～1.5接种，培养4～5天后，细胞65～75％融合时以1：6～8的比例进行传代培养；及间充质干细胞悬浮液的制备：取间充质干细胞原代细胞的培养扩增中P4代细胞培养扩增48-96小时，且细胞融合不超过80％后，用第三消化液消化细胞并洗涤后用5％人白蛋白混悬，再加入生理盐水即可得到所需的间充质干细胞悬浮液”。但该专利并未对DMEM进行改良，致使保藏期短，细胞活性有限。

发明内容

1、要解决的问题

针对上述现有技术存在的问题，本发明提供一种滑膜间充质干细胞的悬浮液及其制备方法，工艺简单、易于制作，有利于提高滑膜间充质干细胞的悬浮稳定性。

2、技术方案

为解决上述问题，本发明采用如下的技术方案。

一种滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，包括以下步骤：

（1）预处理：取滑膜间充质干细胞的商品化包装细胞；

（2）培养：将步骤（1）中滑膜间充质干细胞进行扩增培养，并获取传代培养后的细胞；

（3）悬浮液的制备：将步骤（2）中传代培养后的细胞转移至处理液中处理，即得。

上述所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法中，

步骤（1）中所述的滑膜间充质干细胞为小鼠滑膜间充质干细胞，其货号为货号：CP-M236，并采购自武汉普诺赛生命科技有限公司。

上述所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法中，

步骤（2）中扩增培养的方法如下：

将步骤（1）中滑膜间充质干细胞作为原代细胞，进行第一次培养，接着换成改良的DMEM培养基进行第二次培养，随后加入质量分数为0.50%的胰蛋白酶进行消化处理，其中处理温度为37℃，然后4℃下离心处理，取沉淀的细胞，即可。

上述所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法中，

步骤（2）中第一次培养的条件参数如下：

37℃、体积分数为5%的二氧化碳培养箱、基础培养基、5d培养；