[发明专利]一种滑膜间充质干细胞的悬浮液及其制备方法

权利要求书

1.一种滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，其特征在于：

包括以下步骤：

（1）预处理：取滑膜间充质干细胞的商品化包装细胞；

（2）培养：将步骤（1）中滑膜间充质干细胞进行扩增培养，并获取传代培养后的细胞；

（3）悬浮液的制备：将步骤（2）中传代培养后的细胞转移至处理液中处理，即得。

2.根据权利要求1所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，其特征在于：

步骤（1）中所述的滑膜间充质干细胞为小鼠滑膜间充质干细胞，其货号为货号：CP-M236，并采购自武汉普诺赛生命科技有限公司。

3.根据权利要求1所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，其特征在于：

步骤（2）中扩增培养的方法如下：

将步骤（1）中滑膜间充质干细胞作为原代细胞，进行第一次培养，接着换成改良的DMEM培养基进行第二次培养，随后加入质量分数为0.50%的胰蛋白酶进行消化处理，其中处理温度为37℃，然后4℃下离心处理，取沉淀的细胞，即可。

4.根据权利要求3所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，其特征在于：

步骤（2）中第一次培养的条件参数如下：

37℃、体积分数为5%的二氧化碳培养箱、基础培养基、5d培养；

其中基础培养基为HG-DMEM培养基，并在其培养基中添加胎牛血清、青霉素及链霉素，其中胎牛血清的添加量为HG-DMEM培养基体积的10%，其中青霉素的添加量为100U/mL，其中链霉素的添加量为100U/mL。

5.根据权利要求1所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，其特征在于：

步骤（2）中第二次培养的条件参数如下：

37℃、体积分数为5%的二氧化碳培养箱、改良的DMEM培养基、7d培养、细胞发生70%的融合现象；

其中改良的DMEM培养基的组分如下：

DMEM培养基 100mL，

重组成纤维生长因子FGF-4 100ng，

重组成纤维生长因子FGF-9 100ng，

乙酸锌 0.2mg。

6.根据权利要求1所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，其特征在于：

步骤（2）中传代培养的方法如下：

将扩增培养后的细胞转移至传代培养基中以1：3进行传代培养，每3d更换一次传代培养基；其中传代培养基为DMEM培养基；其中传代培养的条件参数如下：

37℃、体积分数为5%的二氧化碳培养箱。

7.根据权利要求1所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，其特征在于：

步骤（3）中处理液的组分如下：

生理盐水 100mL，

胰蛋白酶 1mg，

透明质酸 0.3mL。

8.根据权利要求1所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，其特征在于：

步骤（3）中处理的温度为10℃。

9.根据权利要求1所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法，其特征在于：

步骤（3）中处理后的保藏温度为4℃。

10.一种滑膜间充质干细胞的悬浮液，其特征在于：

利用权利要求1所述的滑膜间充质干细胞的悬浮液的制备方法制备得到。