[发明专利]一种重组人/鼠si-APOB及其生产方法和应用

权利要求书

1.一种重组人/鼠si-APOB，其特征在于，重组人源si-APOB的序列如SEQ ID NO：1所示，或者为与SEQ ID NO：1所示序列相似度达90％以上的序列。

SEQ ID NO：1序列如下：

重组鼠源si-APOB的序列如SEQ ID NO：2所示，或者为与SEQ ID NO：2所示序列相似度达90％以上的序列。

SEQ ID NO：2序列如下：

2.一种如权利要求1所述重组人/鼠si-APOB的生产方法，其特征在于，包括：以APOB为靶基因设计siRNA，将设计的siRNA嵌合于tRNA支架，在大肠杆菌中重组表达si-APOB。

3.根据权利要求2所述的生产方法，其特征在于，所述tRNA支架的序列为与人丝氨酸tRNA序列相似度达90％以上的序列，所述人丝氨酸tRNA序列如SEQ ID NO：3所示。

SEQ ID NO：3序列如下：

nnngcagcga uggccgagug guuaaggcgu uggacunnnn nnnnnnnnnn 50

nnaauccaau ggggucuccc cgcgcagguu cgaacccugc ucgcugcgcc 100

annn 104。

4.根据权利要求2所述的生产方法，其特征在于，所述siRNA的前体序列为与hsa-miR-34a前体序列相似度达90％以上的序列，所述hsa-miR-34a前体序列如SEQ ID NO：4所示。

SEQ ID NO：4序列如下：

ggccagcugu gaguguuucu uuggcagugu cuuagcuggu uguugugagc 50

aauaguaagg aagcaaucag caaguauacu gcccuagaag ugcugcacgu 100

uguuggccc 109。

5.根据权利要求4所述的生产方法，其特征在于，所述hsa-miR-34a前体序列中的成熟序列部分被人si-APOB序列或鼠si-APOB序列取代，人si-APOB序列如SEQ ID NO.5所示，鼠si-APOB序列如SEQ ID NO.6所示，序列如下:

人siAPOB：5-GCCUCAGUCUGCUUCGCACC-3

鼠siAPOB：5-GUCCCUGAAGAUGUCAAUGC-3。

6.根据权利要求2至5中任一权利要求所述的生产方法，其特征在于，所述生产方法的具体步骤包括：

步骤一、设计合成嵌合人si-APOB序列的miR-34a前体引物或者设计合成嵌合鼠si-APOB序列的miR-34a前体引物；

步骤二、利用pBSMrnaSeph质粒在tRNA反密码子环处具有的酶切位点，将步骤一中嵌合后的前体引物的表达序列插入pBSMrnaSeph质粒中，构建表达载体；

步骤三、将步骤二中构建的表达载体转化感受态大肠杆菌；

步骤四、步骤三中大肠杆菌培养扩增后，提取菌内总RNA，以FPLC分离纯化目标，相应的得到重组人源si-APOB或重组鼠源si-APOB。

7.一种如权利要求1所述重组人/鼠si-APOB在制备治疗高胆固醇血症的试剂、前药、药物、原料药或药物组合中的应用。