[发明专利]一种稻曲病菌人工接种方法

权利要求书

1.一种稻曲病菌人工接种方法，其特征在于，包含以下步骤：

1)采集发病稻田稻曲球，分离纯化，并通过液体培养得到菌丝+分生孢子混合液，作为接种体备用；

2)将水稻按常规播种时间往后推迟15天播种，苗期进行常规水肥管理，移栽至水泥槽中，移栽前施三元复合肥20kg/667㎡、尿素10kg/667㎡，分蘖初期施肥磷肥15kg/667㎡、尿素10kg/667㎡，孕穗初期施肥钾肥5kg/667㎡、尿素10kg/667㎡；

3)接种时间选择破口前3-5天的傍晚进行，用1L的手持喷雾器将接种混体进行喷雾接种，保证喷雾均匀，连续喷2天；

4)接种后的植株用黑布遮阴2天，接种当晚不进行喷水保湿，次日开始定时喷雾保湿，保持相对湿度在95％以上，2天后取下黑布正常光照，继续保持90％相对湿度直至破口后3天，保持温度在24-32℃，温度过高时用遮阳网进行遮阳；

5)水稻黄熟期，稻曲病发病稳定，割下所有稻穗，统计接种穗发病率和病穗平均病粒数，调查发病情况。

2.如权利要求1所述的一种稻曲病菌人工接种方法，其特征在于，所述步骤1)中分离纯化得到菌丝+分生孢子混合液，具体步骤如下：将新鲜稻曲球用75％酒精消毒15s，再经5％次氯酸钠表面杀菌4min后，用无菌水漂洗3-4次；用灭菌滤纸将稻曲球表面水分吸干，切除外层组织，将内层白色菌丝置于PSA培养基上培养，28℃黑暗条件下培养9-11天，边缘长出新的白色菌丝，取边缘菌丝块置于PSB培养基，放入摇床，采用160rpm转速、28℃培养5-7天，得到孢子和菌丝混合液，将该混合液用4层灭菌纱布过滤掉菌丝获得分生孢子悬浮液，将分生孢子液适当稀释后，涂布在水琼脂平板上，显微镜下挑单孢置于新鲜的PSA培养基培养，即得到纯化的稻曲病菌株；稻曲病菌在PSA培养基上培养7-10天后，从菌落边缘取直径5mm的菌饼置于100ml PSB培养基，于摇床28℃、160rpm震荡培养5天，获得菌丝+孢子混合液；用便携式榨汁机处理40s，将混合液打碎成菌丝段+孢子混合液，加PSB培养基稀释调节浓度至显微镜400倍镜下能视野中看到45-55个孢子，作为接种体备用。

3.如权利要求1所述的一种稻曲病菌人工接种方法，其特征在于，所述步骤2)中的水泥槽，长8米、宽1米、高0.8米，所述水泥槽顶部2米高处搭建设置遮阳网架；所述水泥槽上连接自来水管，水龙头安装电磁阀和定时器。

4.如权利要求1所述的一种稻曲病菌人工接种方法，其特征在于，所述步骤4)中的定时喷雾，为早上6点开始定时喷雾保湿，白天2小时喷一次，晚上4小时喷一次，每次喷15分钟，阴雨天无需喷水。

5.如权利要求1所述的一种稻曲病菌人工接种方法，其特征在于，所述步骤5)中，调查时排除无效穗，统计发病穗数和病例数，计算发病率及病情指数。