[发明专利]一种用于宏基因组学病原体检测参考阈值建立的方法

权利要求书

1.一种用于建立宏基因组学病原体检测参考阈值的方法，包括如下步骤：

(1)确定待进行宏基因组学病原体检测的临床样本的类型；

(2)根据所述临床样本的类型确定其组成成分以及人源细胞含量数量级分布范围10ⁿ至10^n+m个细胞/mL；其中，m和n均为正整数；

(3)根据步骤(2)确定的所述临床样本的组成成分及人源细胞含量数量级分布范围10ⁿ至10^n+m个细胞/mL，设置m个阴性对照样本；所述阴性对照样本的组成成分与所述临床样本一致；

当m＝1时，所述阴性对照样本的人源细胞含量为10ⁿ个细胞/mL；

当m≥2时，按照人源细胞含量由少到多的顺序，第1个所述阴性对照样本中人源细胞含量为10ⁿ个细胞/mL，第2个所述阴性对照样本中人源细胞含量为10ⁿ⁺¹个细胞/mL，以此类推，第m个所述阴性对照样本中人源细胞含量为10^n+m-1个细胞/mL；其中，所述阴性对照样本和所述临床样本的对应参考关系如下：第1个所述阴性对照样本作为对应人源细胞含量数量级为10ⁿ至10ⁿ⁺¹个细胞/mL的所述临床样本的参考阴性对照，第2个所述阴性对照样本作为对应人源细胞含量为10ⁿ⁺¹至10ⁿ⁺²的所述临床样本的参考阴性对照，第m个所述阴性对照样本作为对应人源细胞含量为10^n+m-1至10^n+m的所述临床样本的参考阴性对照；

(4)对步骤(3)确定好的m个所述阴性对照样本按照待测临床样本即将进行的宏基因组检测流程进行多批次多重复测试；

(5)将相同人源细胞含量下，不同批次，不同重复检测的所述阴性对照样本记为阴性对照样本A，将所述阴性对照样本A中所检测到的不同病原体的检测序列数按照20Mreads的测序数据量进行标准化处理并统计，得到对应病原体在所述阴性对照样本A中的检测序列数波动区间；

(6)依据步骤(3)中的所述对应参考关系，找到与所述阴性对照样本A对应人源细胞浓度下的临床样本，记为临床样本A；所述临床样本A进行宏基因组学病原体检测时不同病原体的参考阈值为：步骤(5)中得到的对应病原体在所述阴性对照样本A中的检测序列数波动区间上限的120％。

2.一种宏基因组学病原体检测方法，包括：

步骤1：按照权利要求1所述方法建立对应于不同人源细胞含量数量级的不同临床样本进行宏基因组学病原体检测时不同病原体的参考阈值；

步骤2：对所述待测临床样本进行宏基因组检测，并将所得数据按照20Mreads测序数据量进行标准化处理，同批次检测中添加某一已知人源细胞含量的所述阴性对照样本作为批内阴性对照；

步骤3：检测所述待测临床样本中的人源细胞含量；

步骤4：将步骤2中同批次的所述阴性对照样本的检测结果与步骤(5)中确定的对应人源细胞含量下的所述阴性对照样本中病原体的检测序列数波动区间进行对比，若检测到的病原体的检测序列数的标准化数据均在对应波动区间内或不超过波动区间上限的120％，则认为本次检测结果中阴性对照在控；若所述阴性对照样本中检测到的病原体的检测序列数的标准化数据超出对应波动区间上限的120％，则认为本次检测阴性对照异常，重新检测；

步骤5：对于步骤2中阴性对照在控的批次，将该批次检测的所述待测临床样本中的病原体的检测序列数的标准化数据与步骤1确定的对应参考阈值进行比较。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，取经步骤(1)确定类型的所述临床样本共N份，N为大于等于30的正整数，通过实时荧光定量PCR法对N份所述临床样本中的人源核酸含量分别进行测定，从而确定该类型所述临床样本的人源细胞含量数量级分布范围10ⁿ至10^n+m个细胞/mL。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述多批次多重复为：不同人源细胞含量的所述阴性对照样本至少检测3个批次，每批次至少重复检测10次。