[发明专利]一种绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物的制备及应用

说明书

本发明提供了一种绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物的制备方法，将绒毛栓菌发酵液中菌丝体滤出，菌丝体用二氯甲烷和甲醇等体积混合作为提取溶剂提取4~6次，合并提取液，浓缩得到菌丝体提取物浸膏，滤出菌丝体后的发酵液进行减压浓缩得到浓缩发酵液，将菌丝体提取物浸膏与浓缩发酵液混合后，用乙酸乙酯萃取6~8次，合并萃取液并减压浓缩即得绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物。本发明绒毛栓菌乙酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌高度敏感，抑菌活性强，对金黄色葡萄球菌的最低杀菌浓度为0.0975~0.04875 mg/mL，可作为新型的天然金黄色葡萄球菌抑菌剂。

技术领域

本发明涉及一种绒毛栓菌提取物的制备，具体涉及一种绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物的制备方法，本发明同时涉及该绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物作为金黄色葡萄球菌抑菌剂的应用。

背景技术

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）是一种常见的食源性致病菌，其往往引起人类和动物化脓性感染，不仅严重威胁着食品卫生安全，而且在动物生产上也具有严重的危害性。为了减少金黄色葡萄球菌带来的危害，食品等方面普遍应用各种合成抑菌剂，在预防感染的同时，各种抑菌剂的应用也给人类健康带来了新的问题。近年来，人们对天然食品需求增加，天然抑菌剂也得到了研究者的广泛关注。因此，从天然药物中寻找有效抗金黄色葡萄球菌的物质是近年来抑菌药物研发的一个新方向。

高等真菌属于“创造系数”很高的生物资源，它们在长期的进化和环境适应过程中，形成了复杂的化学防御机制，产生许多具有抗癌、抗炎、抑菌等生物活性的次生代谢产物，以此为科学家们提供了研究新型药物的新思路。我国高等真菌资源丰富，正是寻找天然抑菌药物的理想来源。绒毛栓菌（Trametes pubescens）又称绒盖干酪菌，属多孔菌目，多孔菌科的一种，可引起木材腐朽，对木质破坏力较强，腐朽蔓延较迅速，属白色腐朽类型。其子实体一般中等大小，菌盖覆瓦状生长于基物上，无柄，半圆形至扇形、贝形，木栓质，盖面白色或灰白色，有密而细的绒毛，环带不明显。生长于杨、柳、桦、栎、赤杨等阔叶数目倒木或伐木桩上，也生于枕木上。

2012年，司静等研究了绒毛栓菌胞外酶的活性变化，为其工业生产利用奠定基础。随后，司静等（2014年）发现绒毛栓菌菌丝体具有高效稳定且能够对多种染料均有脱色作用，经其降解的染料刚果红代谢产物为萘胺，联苯胺，联苯和叠氮萘，对植物的毒性大大降低，也因此在偶氮染料废水处理中具有广阔的应用前景。程亚刚等（2012年）利用绒毛栓菌发酵生产的漆酶可用于催化白藜芦醇合成白藜芦醇二聚体δ-viniferin。合力强等（2015年）研究了绒毛栓菌发酵液的化学成分，化合物类型涉及倍半萜、三萜、甾醇、环肽、木脂素、黄酮等。不过目前，绒毛栓菌发酵液提取物对金黄色葡萄球菌的抑制方面还未见相关报道，为了充分挖掘绒毛栓菌发酵液次生代谢产物的巨大合成潜力，我们开展了绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物作为金黄色葡萄球菌抑菌剂的研究工作。

发明内容

本发明的目的是提供一种绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物的制备方法；

本发明的另一个目的是绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物作为金黄色葡萄球菌抑菌剂的应用。

一、绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物的制备

本发明具有抑菌活性的绒毛栓菌发酵液乙酸乙酯提取物的制备方法，包括以下步骤：

（1）绒毛栓菌母种的培养方法：选取幼嫩、健壮饱满、无病虫的绒毛栓菌子实体，在无菌条件下消毒后，切取一块组织，迅速移接至马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）平板中心，倒扣平板至室温培养3~5天，待菌丝长满马铃薯葡萄糖琼脂培养基平面，即为绒毛栓菌母种。其中，马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯（去皮）200g、葡萄糖20g、琼脂18~20g、水1000mL、121℃灭菌30min后，置于平板备用。