[发明专利]一种产蔗糖磷酸化酶的多黏类芽孢杆菌及其应用

权利要求书

1.一株多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa菌株SLLSM4，其保藏编号为CCTCCNO：2021695，保藏日期：2021年6月9日，保藏地址为：中国、武汉、武汉大学，保藏单位：中国典型培养物保藏中心。

2.包含如权利要求1所述的多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa菌株 SLLSM4的微生物制剂。

3.如权利要求2所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂中含有活菌数不低于1.0×10⁶个/mL的多黏类芽孢杆菌 SLLSM4细胞。

4.一种生产蔗糖磷酸化酶的方法，其特征在于，在无菌操作下，用灭菌接种环接多黏类芽孢杆菌 SLLSM4到已高温灭菌的发酵培养基中，发酵培养基的pH=6.0，在37℃、180r/min摇床恒温发酵培养24h后，取发酵液按照接种量10.0%接入新的发酵培养基中摇床恒温37℃培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；所述多黏类芽孢杆菌SLLSM4，其保藏编号为CCTCC NO：2021695。

5.一种利用权利要求1所述的多黏类芽孢杆菌Paenibacillus polymyxa菌株SLLSM4制备α熊果苷的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）、将保存的多黏类芽孢杆菌 SLLSM4接种于斜面培养基上，置于37℃恒温培养箱培养2天，获得活化菌种，用无菌水洗脱菌种获得浓度为1.0×10⁶个/mL的多黏类芽孢杆菌SLLSM4菌悬浮液，将菌种悬浮液接入摇瓶优化后的发酵培养基，在37℃、180r/min摇床恒温培养72h，经10000r/min、15min离心机离心得到上清液即为蔗糖磷酸化酶粗酶液；

所述斜面培养基为LM培养基；所述LM培养基配方为：蔗糖 lg； 酵母膏 1g； 蛋白胨1g；K₂HPO₄ 0.5g； MgSO₄.7H₂O 0.04 g；MnCI₂.4H₂O 0.02g； FeSO₄.4H₂O 0.002g； 维生素B10.0001g；L-抗坏血酸0.005g； H₂O 100mL；

所述摇瓶优化后的发酵培养基配方为：蔗糖 5g； 蛋白胨8g；K₂HPO₄ 0.5g； MgSO₄.7H₂O0.04 g；MnCI₂.4H₂O 0.02g； FeSO₄.4H₂O 0.002g； 维生素B1 0.0001g；L-抗坏血酸0.005g；H₂O 100 mL；

（2）、在温度为50℃，加入30mmol/L、pH为6.0磷酸盐缓冲液10mL，蔗糖5g，氢醌50g/L，再加入5mL蔗糖磷酸化酶粗酶液，经180r/min摇床避光反应4 h，即可得到α熊果苷。