[发明专利]一种HPLC-MS/MS法测定猪血浆中布舍瑞林成分含量的方法

说明书

本发明提供了一种HPLC‑MS/MS法测定猪血浆中布舍瑞林成分含量的方法，包括以下步骤：(1)绘制标准曲线：将不同浓度的布舍瑞林标准溶液分别加至空白猪血浆中，制备成系列浓度的标准曲线样品；以定量离子峰面积为纵坐标，以布舍瑞林浓度为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程；(2)样品前处理：往猪血浆样品中加入甲酸乙腈溶液，涡旋、超声后，离心，取上清液，离心后的固体中重复以上步骤，取上清液，合并，氮吹吹干后，复溶，过滤膜；(3)HPLC‑MS/MS检测：将前处理后的样品经HPLC‑MS/MS检测，获得的检验数据通过线性回归方程计算得出布舍瑞林浓度。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种HPLC-MS/MS法测定猪血浆中布舍瑞林成分含量的方法。

背景技术

布舍瑞林(Buserelin)是一种合成的下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)类似物，结构式为Pyr-His-Ser-Tyr-D-Ser(tBu)-Leu-Arg-Pro-NHET。布舍瑞林可以促使黄体生成素(LH)、促卵泡激素(FSH)和性激素分泌的增加，其促进LH和FSH的作用效力比天然促性腺激素释放激素强。布舍瑞林在畜牧行业，主要用于母猪单次定时输精程序、奶牛同期发情和定时输精程序。

布舍瑞林在靶动物猪的临床给药剂量为10μg/头，在经血液循环到达前腔静脉时的药物浓度非常低，液相色谱法的灵敏度已经不能达到检测要求。目前市售的测定布舍瑞林的酶联免疫试剂盒和放射性免疫试剂盒较少，且多为测定人、大鼠和小血浆或血清中布舍瑞林的的产品，没有测定猪血浆或血清中布舍瑞林药物浓度的试剂盒。布舍瑞林又是GnRH的类似物，若采用放射性免疫法和酶联免疫法测定，内源性的GnRH可能会干扰检测，不能准确测定血浆中布舍瑞林的浓度。因此，迫切需要开发一种检测猪血浆中布舍瑞林含量的方法。

发明内容

本发明针对现有技术中检测猪血浆中布舍瑞林含量的不足，提供一种液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定猪血浆中布舍瑞林成分含量的方法，该方法测定猪血浆中的布舍瑞林呈现出优异的方法学特征，灵敏度高，重复性及回收率较好。

本发明提供了一种HPLC-MS/MS法测定猪血浆中布舍瑞林成分含量的方法，包括以下步骤：

(1)绘制标准曲线

将不同浓度的布舍瑞林标准溶液分别加至空白猪血浆中，制备成4～10个系列浓度的标准曲线样品；标准曲线样品经过HPLC-MS/MS检测后，以定量离子峰面积为纵坐标，以布舍瑞林浓度为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程；

(2)样品前处理

往猪血浆样品中加入甲酸乙腈溶液，涡旋、超声后，离心，取上清液，离心后的固体中再加入甲酸乙腈溶液，涡旋、超声后，离心，取上清液，合并两次上清液，水浴氮吹吹干后，复溶，过滤膜，待用；

(3)HPLC-MS/MS检测

将经前处理后的样品转移至进样瓶中，用HPLC-MS/MS检测，获得的检验数据通过线性回归方程计算得出待测样品中布舍瑞林浓度。

作为优选，所述方法的检测限和定量限分别为0.125ng/mL和0.25ng/mL。

作为优选，标准曲线样品的浓度范围为0.25～25ng/mL。如制备8个系列浓度的标准曲线样品，布舍瑞林的浓度分别为0.25、0.5、1、2.5、5、10、2和25ng/mL。

作为优选，猪血浆样品的制备：猪前腔静脉采集静脉血，0～4℃下1000～5000rmp下离心5～15min，取上清，即为猪血浆样品。猪前腔静脉采血可以采集到高质量的血浆样品，用于药物水平监测能提高检测的准确性。