[发明专利]一种HPLC-MS/MS法测定猪血浆中布舍瑞林成分含量的方法

权利要求书

1.一种HPLC-MS/MS法测定猪血浆中布舍瑞林成分含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)绘制标准曲线

将不同浓度的布舍瑞林标准溶液分别加至空白猪血浆中，制备成4～10个系列浓度的标准曲线样品；标准曲线样品经过HPLC-MS/MS检测后，以定量离子峰面积为纵坐标，以布舍瑞林浓度为横坐标绘制标准曲线，得线性回归方程；

(2)样品前处理

往猪血浆样品中加入甲酸乙腈溶液，涡旋、超声后，离心，取上清液，离心后的固体中再加入甲酸乙腈溶液，涡旋、超声后，离心，取上清液，合并两次上清液，水浴氮吹吹干后，加入复溶溶液复溶，过滤膜，待用；

(3)HPLC-MS/MS检测

将经前处理后的样品转移至进样瓶中，用HPLC-MS/MS检测，获得的检验数据通过线性回归方程计算得出待测样品中布舍瑞林浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的检测限和定量限分别为0.125ng/mL和0.25ng/mL。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，标准曲线样品的浓度范围为0.25～25ng/mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，猪血浆样品的制备包括以下步骤：猪前腔静脉采集静脉血，0～4℃下1000～5000rmp下离心5～15min，取上清，即为猪血浆样品。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，甲酸乙腈溶液中，甲酸与乙腈的体积比为(0.1～0.2)：100。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)采用的复溶溶液为甲酸乙腈溶液和甲酸水溶液以体积比(20～30)：(70～80)形成的混合溶液，其中，甲酸乙腈溶液中甲酸与乙腈的体积比为(0.05～0.5)：100，甲酸水溶液中甲酸与水的体积比为(0.05～0.5)：100。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)采用的复溶溶液为甲酸乙腈溶液和甲酸水溶液以体积比(23～28)：(72～77)形成的混合溶液，其中，甲酸乙腈溶液中甲酸与乙腈的体积比为(0.1～0.2)：100，甲酸水溶液中甲酸与水的体积比为(0.1～0.2)：100。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，液相色谱参数条件为：

色谱柱：C18色谱柱，填料粒径为2.7μm，直径4.6mm，长度100mm；

流动相A：甲酸水溶液，其中甲酸与水的体积比为0.1∶100；

流动相B：甲酸乙腈溶液，其中甲酸与乙腈的体积比为0.1∶100；

流速：0.6mL/min；

进样量：5μL；

每个样品的总运行时间为10分钟。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，流动相梯度洗脱程序如下：

0.05min，流动相A为75v/v％，流动相B为25v/v％；

5.0min，流动相A为10v/v％，流动相B为90v/v％；

7.0min，流动相A为10v/v％，流动相B为90v/v％；

7.1min，流动相A为75v/v％，流动相B为25v/v％；

10min，流动相A为75v/v％，流动相B为25v/v％。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，串联质谱参数条件为：

离子源：电喷雾离子源；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测；

电喷雾电压：5500V；离子源温度：550℃；雾化气压力：55psi；气帘气压力：30psi；辅助气压力：60psi；

去簇电压：68V；射入电压：10V；定量离子对：620.6/592.7，定性离子对：620.6/249.3，碰撞能量分别为23eV和40eV，碰撞室射出电压均为13V。