[发明专利]一种β-丙內酯残留量检测方法及其应用

说明书

本发明提供一种β‑丙內酯残留量检验方法，采用气相色谱‑质谱联用，包括以下条件和步骤：(1)气相色谱‑质谱联用的条件和程序：毛细管色谱柱为ABFFAP，载体为He气，流速1ml/min，汽化室温度250℃，进样量0.4ul；质谱离子源温度200℃，接口温度250℃，定量离子42amu；程序为：初始温度100℃，保持1min，以20℃/min速率升温至180℃；(2)确定线性、检测限；(3)待测样品β‑丙內酯水解残留量测定。本发明提供的方法能准确分离出单一β‑丙內酯，降低β‑丙內酯检测限到1.95ppm，灵敏度更高，操作简便，能够更准确地监控β‑丙内酯残留，提高狂犬病疫苗生产的安全性。

技术领域

本发明属于生物制品领域，具体涉及一种β-丙內酯残留量检验方法及其应 用。

背景技术

人用狂犬病疫苗的生产过程中，β-丙內酯对病毒具有很强的灭活作用，但其 本身具有刺激性，现有方法通常采用气相色谱法检测灭活后β-丙內酯残留量，目 前该法检测β-丙內酯残留量时的检测限能达8.96ppm，当样品β-丙內酯残留量 低于8.96ppm时，检验结果出现假阴性，导致检测结果不够准确。而检测限越低 能够证明药品安全性越高，且现有方法中气相色谱法色谱峰中杂质峰较多，检测 结果不够准确。气相色谱杂质峰较多，会使检测结果受杂质峰影响。为解决现状， 亟需一种操作简便，准确率高且检测限低的方法。

发明内容

本发明目的在于提供一种β-丙內酯残留量检测方法及其应用，所述方法够准 确地分离出单一β-丙內酯，减少其它杂质，从而降低β-丙內酯检测限到1.95ppm， 操作简便。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

本发明一方面提供一种β-丙內酯残留量检验方法，其特征在于：采用气相色 谱-质谱联用法，包括以下步骤：

(1)气相色谱-质谱联用的条件和程序

所述气相色谱条件为：毛细管色谱柱为AB FFAP，载体为He气，流速 1ml/min，汽化室温度250℃，进样量0.4ul；

所述质谱条件为：质谱离子源温度200℃；接口温度250℃；定量离子42amu；

程序为：先经气相色谱再经质谱，条件均为初始温度100℃，保持1min，以 20℃/min速率升温至180℃；

(2)绘制标准曲线，确定线性、检测限；

(3)待测样品β-丙內酯水解残留量测定：将待测样品按照步骤(1)进样测 定，再通过步骤(2)的标准曲线计算β-丙內酯含量。

进一步地，步骤(2)中，绘制标准曲线，确定线性、检测限采用以下方法： 精密称取β-丙內酯100μl，加乙腈(色谱纯)900μl，得到稀释度为1：10的β- 丙內酯，再用乙腈依次稀释成为1:100、1:1000、1:2000、1：4000、1:8000:、1:16000、 1：32000、1：64000、1:128000、1:256000、1：512000，取1:1000～1：512000 分别进样，进行气相色谱-质谱联用法测定，再以β-丙內酯含量为横坐标，峰面 积为纵坐标，绘制标准曲线，同时以乙腈作空白对照，将信噪比大于3的供试品 浓度确定为本方法的检测限。

检测待测样品时，将待测样品进行气相色谱-质谱联用法测定，通过所述标 准曲线，计算待测样品的β-丙內酯含量。

本发明另一方面还提供上述β-丙內酯残留量检验方法在人用狂犬病疫苗的 生产工艺中的应用。在人用狂犬病疫苗生产工艺中，加入β-丙內酯灭活，37℃水 浴水解2h。在检测β-丙內酯含量时，分别于水解前后取样，进行气相色谱-质谱 联用法测定，再通过标准曲线，计算β-丙內酯含量。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：