[发明专利]一种检测恙虫病东方体抗体的荧光免疫层析试纸条及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种检测恙虫病东方体抗体的荧光免疫层析试纸条，包括硝酸纤维素膜(4)，所述硝酸纤维素膜(4)两端分别设有样品垫(2)和吸水垫(7)，所述样品垫(2)、吸水垫(7)和硝酸纤维素膜(4)均置于底板(3)上，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(4)设有检测线(5)和控制线(6)，所述检测线(5)含有恙虫病东方体混合重组抗原，所述质控线(6)含有兔抗恙虫病东方体多克隆抗体。

2.根据权利要求1所述试纸条，其特征在于，所述恙虫病东方体混合重组抗原是以从恙虫病东方体SJ2菌株感染的L929细胞培养液中提取的基因组为模板，扩增目的基因；将所得目的基因连接表达载体pET-28(+)，经转化、表达，所得SJ2重组抗原与Ptan株重组抗原和Gilliam株重组抗原按照1：(0.5-1.5)：(0.5-1.5)体积比混合获得；其中，所述扩增目的基因的上下引物和下游引物分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述试纸条，其特征在于，0.1-0.5mg/mL的恙虫病东方体混合重组抗原被吸收在检测线中；0.3-0.7mg/mL的兔抗恙虫病东方体多克隆抗体被吸收在质控线中。

4.包含权利要求1-3中任意一项所述试纸条的试纸卡或试剂盒。

5.权利要求1-3中任意一项所述试纸条，或权利要求4所述试纸卡，或权利要求4所述试剂盒在检测恙虫病东方体抗体中的应用。

6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，将样品稀释液、荧光微球偶联的恙虫病东方体混合重组抗原和待检测血清混合后，置于样品垫上，静置，紫外灯下观察；当质控线和检测线均显色，则待检测血清为阳性；当质控线显色，而检测线不显色，则待检测血清为阴性；

其中，所述样品稀释液、荧光微球偶联的恙虫病东方体混合重组抗原和待检测血清的体积比为60：(20-60)：(2-5)；

其中，所述静置为20-30℃静置5min以上。

7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述荧光微球偶联的恙虫病东方体混合重组抗原的制备方法为将含有荧光微球和2-吗啉乙磺酸缓冲液的混悬液活化后，加入恙虫病东方体混合重组抗原进行偶联、封闭，即得。

8.根据权利要求6所述应用，其特征在于，所述活化为经1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺溶液活化；所述荧光微球与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺的用量比为0.1μL：(10-30)μg；

其中，所述活化为1-7℃活化0.5h以上。

9.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述荧光微球与恙虫病东方体混合重组抗原的用量比为0.1μL：(4-14)μg。

10.根据权利要求7所述应用，其特征在于，所述偶联为1-7℃偶联0.5h以上；

其中，所述偶联后加入牛血清蛋白溶液，进行封闭；其中，所述封闭为1-7℃封闭0.5h以上；

其中，所述封闭后，用pH为6.0-7.0的保护液保护。