[发明专利]快速检测猫疱疹病毒的ERA核酸试纸条扩增试剂盒及制备方法和检测方法

说明书

本发明公开了快速检测猫疱疹病毒的ERA核酸试纸条扩增试剂盒及制备方法和检测方法，它可有效扩增靶基因。敏感性能够检测到7.86 × 10¹copies/μL；特异性强，无交叉反应；重复性好，组内和组间变异系数均小于5%。本发明的ERA等温扩增体系，反应迅速，温度范围广，在37~40℃均能有效扩增靶基因，但在37℃反应30 min扩增效果最佳。本发明的扩增试剂盒能够快速、高效、灵敏地检测猫疱疹病毒，具有操作简单、特异性强、安全无污染等特点，且反应结果易于观察，不仅对现地快速检测筛查猫疱疹病毒提供了有效的技术手段，而且对防控由FHV带来的对宠物及虎、豹等猫科类动物行业的经济损失具有重要意义。

技术领域

本发明设计快速检测猫疱疹病毒的ERA核酸试纸条扩增试剂盒及制备方法和检测方法。

背景技术

猫传染性鼻气管炎（feline infectious rhinotracheitis）是由猫疱疹病毒１型（feline herpesvirus-1, FHV-1）引起的一种以上呼吸道症状为主的急性、高度接触性传染病。FHV-1主要感染猫，可以引起体温升高、精神沉郁、厌食、咳嗽、打喷嚏等临床症状。临床上幼猫发病率为100%，致死率高达50%。虽然猫是本病毒的自然宿主，但近年来常有印度豹、虎等猫科类动物感染FHV-1的报道。FHV-1是猫上呼吸道感染和眼部损伤的最主要病原之一，常与猫杯状病毒混合感染，也可引起细菌的继发感染，严重威胁着猫科类动物的健康，给疾病的防控带来极大的困难。目前，FHV的检测方法主要有核酸检测、病毒分离鉴定、免疫荧光检测及抗体检测等，这些都需要昂贵的仪器设备和专业的技术人员进行操作，不能满足非实验室等基层现场条件下的检测要求。

发明内容

本发明提供了快速检测猫疱疹病毒的ERA核酸试纸条扩增试剂盒及制备方法和检测方法，它能够快速、高效、灵敏地检测猫疱疹病毒，具有操作简单、特异性强、安全无污染，且反应结果易于观察，不仅对现地快速检测筛查猫疱疹病毒提供了有效的技术手段，而且有效地防控由FHV带来的对宠物及虎、豹等猫科类动物的影响。

本发明采用了以下技术方案：快速检测猫疱疹病毒的ERA核酸试纸条扩增试剂盒，它包括以下试剂：a、包含快速检测猫疱疹病毒的ERA核酸试纸条扩增试剂盒的扩增引物对及探针；b、含猫疱疹病毒TK基因的阳性对照样品和阴性对照样品；c、等温核酸扩增试剂盒和快速检测所用的试纸条；d、所述的核酸扩增试剂盒即重组酶聚合酶等温核酸扩增试剂盒，含有重组酶冻干酶粉、溶解剂、激活剂和ddH₂O。

所述的快速检测猫疱疹病毒的ERA核酸试纸条扩增试剂盒的扩增引物对包括上游引物和下游引物，

上游引物：

ERA-F：5’-TTGAAACTGATGTTGTCGGTGGTATCTATGC-3’，

下游引物：

ERA-R：5’-Biotin-TACAGACCCAAGAGTCATATCACCCACAAAAT-3’。

所述的探针为探针：

Probe：

5’-FAM-GTATCTATGCCGTCCAGGACCGGAAACGACGT[THF]GTGAATTATCAGCTG-C3Spacer-3’。

本发明还公开了快速检测猫疱疹病毒的ERA核酸试纸条扩增试剂盒的制备方法，它包括以下步骤：

步骤一，扩增引物对及探针的制备：在下游引物5’端偶联上生物素；探针5’端偶联上FAM基团，中间位置采用THF（四氢呋喃）替代一个碱基，3’端用C3-间臂基团处理；步骤二，核酸扩增试剂盒即重组酶聚合酶等温核酸扩增试剂盒，含有重组酶冻干酶粉、溶解剂、激活剂、ddH₂O，为商品化制备；步骤三，所用的快速检测试纸条：含有抗生物素抗体、抗FAM抗体、抗鼠抗体及金标颗粒；步骤四，所述的猫疱疹病毒TK基因的阳性对照样品和阴性对照样品均为临床检测获得的样品。