[发明专利]毡毛青霉DZ-9-67及其在杜仲叶总黄酮提取中的应用

说明书

本发明公开了一种毡毛青霉DZ‑9‑67及其在杜仲叶总黄酮提取中的应用，杜仲叶粉中加入无菌蔗糖水溶液，接种毡毛青霉DZ‑9‑67孢子，于28–30℃发酵2–3d，发酵物加入50％–70％乙醇水溶液中浸提后，再进行超声提取，抽滤，滤液浓缩后，获得浓缩物，真空干燥，获得杜仲叶总黄酮粗提物。本发明提供的杜仲叶总黄酮提取方法，较不采用发酵预处理的超声乙醇提取法相比，杜仲叶总黄酮的提取得率可以提高34.2％。

(一)技术领域

本发明属于生物化工技术领域，具体涉及一株毡毛青霉DZ-9-67及其在杜仲叶总黄酮提取中的应用。

(二)背景技术

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)，又名胶木，为杜仲科杜仲属植物。杜仲在我国栽培已有两千多年的历史。我国第一部药书汉代的《神农本草经》就记载了杜仲树皮的药效，并将杜仲列为上品。明代李时珍著作《本草纲目》中更为详细的记述了杜仲药名的由来和药效。2020年版中国药典一部药材和饮片中收录了杜仲(Eucommiae Cortex)和杜仲叶(Eucommiae Folium)。药典记载杜仲的功能与主治为：补肝肾，强筋骨，安胎。用于肝肾不足，腰膝酸痛，筋骨无力，头晕目眩，妊娠漏血，胎动不安；杜仲叶的功能与主治为：补肝肾，强筋骨。用于肝肾不足，头晕目眩，腰膝酸痛，筋骨痿软。

杜仲叶含有多种生物活性成分，包括木脂素类、环烯醚萜类、苯丙素类、黄酮类、多糖类等化合物，其中，黄酮类化合物含量较高，如钟淑娟的分析表明：杜仲皮、叶、雄花、籽的总黄酮平均含量分别为1.33％、9.02％、3.02％和1.22％[钟淑娟,杨欣,李静,等.杜仲不同部位总黄酮含量及抗氧化活性研究.中国药房,2017,28(13):1787-1790]。黄酮类化合物在抗氧化、抑制脂质过氧化反应、预防动脉粥样硬化及保护心脑血管、防癌、抗癌等方面效果良好，在辅助药物和保健食品领域都有广泛的应用。杜仲叶黄酮含量丰富，是提取黄酮的良好原料。

目前，国内有较多的关于杜仲叶总黄酮的提取方法报道，方法主要有水提法、有机溶剂提取法、超声波或微波辅助提取法、CO₂超临界萃取法、酶辅助提取法和半仿生提取法等。不同的提取方法有各自的优缺点，总黄酮得率也差异较大。水提法成本低，但总黄酮得率较低；有机溶剂提取法的总黄酮得率有显著提高，但需要大量有机溶剂；超声或微波辅助提取法在有机溶剂提取法的基础上，增加超声波或微波处理，促进总黄酮溶出，提取得率有一定的提高；CO₂超临界萃取法可以获得较高的提取得率和产品纯度，但设备要求比较高；酶辅助提取法的提取条件温和、活性物质不易失活，但商品化的纯酶成本较高；半仿生提取法工艺复杂，高温煎煮容易破坏黄酮的结构。几种方法相比之下，超声波辅助溶剂提取有一定的优势。

为了提高杜仲叶总黄酮的提取得率，本发明对杜仲叶总黄酮超声波辅助提取工艺进行改进，增加微生物发酵预处理步骤，可以显著提高杜仲叶总黄酮的提取得率。

(三)发明内容

本发明目的是提供一株新的微生物菌株—毡毛青霉(Penicillium velutinum)DZ-9-67，及其在杜仲叶总黄酮提取中的应用，能够显著提高杜仲叶总黄酮的提取得率。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一株用于杜仲叶总黄酮提取的发酵预处理微生物菌株—毡毛青霉(Penicillium velutinum)DZ-9-67，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCCNo:61728，保藏日期2021年6月21日，地址：广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼；邮编510070。