[发明专利]一种鱼皮脱细胞真皮基质支架及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种鱼皮脱细胞真皮基质支架的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

1)制备真皮层皮片工艺：将鱼皮在酸溶液中膨化，膨化之后去除表皮和皮下组织，获得真皮层，然后将所述真皮层在盐溶液中去膨化，得到真皮层皮片；

2)病毒灭活、脱色工艺：将所述真皮层皮片浸泡在病毒灭活及脱色溶液中进行病毒灭活和脱色处理，其中，所述病毒灭活及脱色溶液含有过氧化物；

3)脱脂工艺：将步骤2)处理后的真皮层皮片分别浸泡在碱溶液及第一表面活性剂溶液中进行脱脂；

4)去除免疫原性工艺：将步骤3)处理后的真皮层皮片分别浸泡在低渗液、胰蛋白酶溶液和第二表面活性剂溶液中去除免疫原性物质；其中，所述低渗液的渗透压小于7.6个大气压；

5)交联工艺：将步骤4)处理后的真皮层皮片在加热的条件下进行交联处理；或将步骤4)处理后的真皮层皮片浸泡在交联剂溶液中进行交联处理；

6)冻干定型工艺：将步骤5)处理后的真皮层皮片洗涤后置于冻干剂溶液中进行冻干；

7)切口工艺：将步骤6)处理后的真皮层皮片依次进行穿透性切口和整形；

8)灭菌工艺：将步骤7)处理后的真皮层皮片进行电子加速器辐照灭菌，得到所述鱼皮脱细胞真皮基质支架。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，步骤1)中，所述鱼皮来自于草鱼、黑鱼、罗非鱼、鳕鱼、鳗鱼、鲶鱼和鳝鱼中的任意一种；

优选的，所述真皮层的厚度为0.4-1.6mm。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，步骤1)中，所述酸溶液选自盐酸溶液、硫酸溶液、磷酸溶液、甲酸溶液和乙酸溶液中的任意一种或几种，所述酸溶液中酸的浓度优选为0.01-1mol/L；和/或

所述膨化的时间为10-60min；和/或

所述盐溶液选自氯化钠溶液、氯化钾溶液和氯化钙溶液中的任意一种或几种，所述盐溶液中盐的浓度优选为0.5-7重量％；和/或

所述去膨化的时间为0.5-3h。

4.根据权利要求1-3中任意一项所述的方法，其中，步骤2)中，所述病毒灭活和脱色处理的时间为2-12h；和/或

所述过氧化物的浓度为0.5-5重量％；和/或

所述过氧化物选自过氧乙酸和/或过氧化氢；

优选的，所述病毒灭活及脱色溶液还含有碱；所述碱优选选自氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠和碳酸氢钾中的一种或几种。

5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其中，步骤3)中，所述碱溶液的溶质选自碳酸钠、碳酸氢钠和氢氧化钠中的至少一种，所述碱溶液中溶质的浓度优选为0.5-2重量％；和/或

所述第一表面活性剂选自十二烷基磺酸钠、烷基葡萄糖苷、TritonX-100、脱氧胆酸钠、3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸、4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇、叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇中的至少一种，所述第一表面活性剂溶液中表面活性剂的浓度优选为0.1-5重量％；

优选的，所述脱脂的总时间为1-40h。

6.根据权利要求1-5中任意一项所述的方法，其中，步骤4)中，所述低渗液为超纯水；和/或

所述胰蛋白酶溶液中胰蛋白酶的浓度为0.01-2重量％；和/或

所述第二表面活性剂选自十二烷基磺酸钠、烷基葡萄糖苷、TritonX-100、脱氧胆酸钠、3-[(3-胆固醇氨丙基)二甲基氨基]-1-丙磺酸、4-(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基-聚乙二醇、叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇中的至少一种，所述第二表面活性剂溶液中表面活性剂的浓度优选为0.5-5重量％；

优选的，去除免疫原性物质的总时间为6-70h。

7.根据权利要求1-6中任意一项所述的方法，其中，步骤5)中，所述加热的条件包括：温度为100-160℃，时间为24-72h；和/或

所述交联剂溶液为京尼平溶液、碳化二亚胺溶液或戊二醛溶液；和/或

所述交联剂溶液中交联剂的浓度为0.1-3重量％；和/或

所述交联处理的时间为2-15h。