[发明专利]一种重金属铀诱导仓鼠卵巢细胞损伤的研究方法

权利要求书

1.一种重金属铀诱导仓鼠卵巢细胞损伤的研究方法，其特征在于，所述的研究方法依次包括如下步骤：

(1)建立重金属铀诱导仓鼠卵巢细胞损伤模型；

(2)分别提取正常仓鼠卵巢细胞RNA和步骤(1)所得损伤模型的仓鼠卵巢细胞RNA；

(3)对正常仓鼠卵巢细胞RNA和损伤模型的仓鼠卵巢细胞RNA分别进行转录组测序；

(4)对正常仓鼠卵巢细胞和损伤模型的仓鼠卵巢细胞进行转录水平差异比较分析，筛选出差异表达基因；

(5)进行差异表达基因的功能富集分析。

2.根据权利要求1所述的研究方法，其特征在于：步骤(1)中，用50-1000μmol/L重金属铀染毒4-48h建立仓鼠卵巢细胞损伤模型。

3.根据权利要求1所述的研究方法，其特征在于：步骤(2)中，RNA的提取使用RNA提取试剂盒，并参照RNA提取试剂盒的使用方法进行提取；对提取的RNA进行质量检测。

4.根据权利要求1所述的研究方法，其特征在于：步骤(3)中，对提取的仓鼠卵巢细胞RNA，先去除核糖体RNA，将RNA片段化，然后逆转录合成cDNA，再进行末端修复，加A尾，加接头，最后PCR扩增后进行测序。

5.根据权利要求1所述的研究方法，其特征在于：步骤(4)中，差异表达基因的筛选采用DESeq软件进行标准化处理，计算差异倍数，并采用负二项分布检验的方式进行差异显著性检验，差异筛选条件为P0.05并且差异倍数大于2。

6.根据权利要求1所述的研究方法，其特征在于：步骤(5)中，采用GO和KEGG对差异表达基因进行功能富集分析。

7.根据权利要求6所述的研究方法，其特征在于：GO功能富集分析是将全部基因作为背景，差异表达基因作为背景列表中筛选出的候选列表，利用超几何分布检验计算富集显著性，使用fisher算法对差异表达基因进行生物学过程、细胞组分和分子功能富集分析。

8.根据权利要求6所述的研究方法，其特征在于：KEGG功能富集分析是利用KEGG数据库对差异表达的基因进行通路分析，并采用超几何分布检验的方法计算每个通路中差异基因富集的显著性。

9.根据权利要求1所述的研究方法，其特征在于，所述的研究方法在步骤(5)后还包括如下步骤：

(6)选取差异表达显著的基因，验证转录组测序数据的可靠性。

10.根据权利要求9所述的研究方法，其特征在于：步骤(6)中，选取差异表达显著的基因，采用实时荧光定量PCR技术进行检测，并与转录组测序数据中该基因的表达趋势比较，验证转录组测序数据的可靠性。