[发明专利]一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法

说明书

本发明涉及生物技术领域，具体地说是一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法。一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，其特征在于：具体方法如下：鉴定并筛选出黑腹虎头蜂；毒素进行甲醛灭活脱毒处理；进行动物免疫；免疫后采血；保存；S/D病毒灭活处理；将收集后的血浆沉淀物进行明矾吸附处理；进行超滤；将超滤后的血浆混合物进行DEAE凝胶柱层析处理；将F（ab’）₂免疫球蛋白抗体加入适量的NaCl和间甲酚的溶液中；将胡蜂毒素抗毒血清原液进行除菌过滤，分装。同现有技术相比，制备出来的胡蜂毒素抗毒血清对七里蜂，凹纹胡蜂，黑腹虎头蜂等不同胡蜂种类，云南大理胡蜂，陕西安康胡蜂等不同地域的胡蜂的毒素具有有效的中和效果。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说是一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法。

背景技术

黑腹虎头蜂又名杀人蜂，腹黑，全身有绒毛，世界上最毒的毒蜂之一，具有超强攻击性，超强毒性，又因为是群居性生物，一个蜂巢中多达上千只，所以时常有蜇伤蛰死人的报道。

但是，目前为止我国尚无治疗黑腹虎头蜂蜇伤的专用药物，针对胡蜂蜇伤的患者，只能对症采取一般的措施，一般的措施对轻症有一定的效果，但是并未从根本上将体内的毒素消灭，体内的毒素则继续对身体造成破坏，最终造成严重后果。

抗毒血清是目前全世界治疗有毒动物咬伤或蜇伤的最有效的首选急救药物，如抗蛇毒血清等；患者如果可以在第一时间及时注射抗毒血清，其生存的可能性将大大增加，同时为后续抢救和治疗赢得了宝贵的时间。但是，目前我国尚无胡蜂毒素抗毒血清，有效的胡蜂毒素抗毒血清的制备研究也是空白的；并且，由于胡蜂种类的不同，其毒素组成也存在很大差异，实验室鉴定黑腹虎头蜂有较大价值，而且，制备胡蜂毒素抗毒血清，尤其是效价高、纯度好的抗毒血清具有很大难度和挑战。

发明内容

本发明为克服现有技术的不足，提供一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，制备出来的胡蜂毒素抗毒血清不仅对黑腹虎头蜂蜂毒具有中和作用，而且对云南大理胡蜂、凹纹胡蜂、陕西安康胡蜂等多种胡蜂蜂毒具有有效的中和效果。

为实现上述目的，设计一种制备胡蜂毒素抗毒血清的方法，其特征在于：具体方法如下：

（1）分子鉴定并筛选出黑腹虎头蜂；

（2）将黑腹虎头蜂胡蜂毒素进行甲醛灭活脱毒处理；

（3）将甲醛灭活脱毒处理后的黑腹虎头蜂胡蜂毒素进行动物免疫；

（4）免疫后采血；

（5）采完的血浆置2~8℃的冷库中保存，保存5年；

（6）将血浆进行S/D病毒灭活处理；

（7）将灭活处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；

（8）将板框压滤后的血浆混合物中添加1.5~2倍的蒸馏水进行血浆稀释；

（9）将稀释后的血浆混合物进行胃酶消化处理；

（10） 将胃酶消化处理后的血浆混合物进行第一次沉淀处理；

（11） 将第一次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；

（12） 将板框压滤处理后的血浆混合物进行第二次沉淀处理；

（13） 将第二次沉淀后的血浆混合物进行板框压滤处理，并收集沉淀物，弃上清；

（14） 将收集后的血浆沉淀物进行明矾吸附处理；

（15） 将明矾吸附处理后的血浆混合物进行板框压滤处理，并弃沉淀物；

（16） 将板框压滤处理后的血浆混合物加入3倍纯化水进行超滤；

（17） 将超滤后的血浆混合物进行DEAE凝胶柱层析处理，纳米膜过滤，制得F（ab’）₂免疫球蛋白抗体；

（18） 将F（ab’）₂免疫球蛋白抗体加入适量的NaCl和间甲酚的溶液中，并调整PH值至6~7制得胡蜂毒素抗毒血清原液；

（19） 将胡蜂毒素抗毒血清原液进行除菌过滤，分装。